七水中细菌菌落总数cfu的测定.doc

《 环境工程微生物学实验》 实 验 指 导 书 鲍立宁 编 写 适用专业： 环境工程 安徽建筑大学环境与能源工程学院 2017 年 9 月 前 言 《环境工程微生物学》是环境工程专业的必修课。训练实践技能的一个重要教学环节 目 录 3 实验一 显微镜的使用及微生物形态的观察 1 实验二 活性污泥中原生及微型后生动物的观察和数量的测定 3 实验三 培养基的制备及灭菌 4 实验四 大肠杆菌生长曲线的测定 7 实验五 细菌淀粉酶和过氧化氢酶的定性测定 8 实验六 空气中微生物的检测 9 实验七 水中细菌菌落总数（CFU）的测定 10 实验八 水源水中粪便污染指示菌的检测—多管发酵法 13 实验九 环境中絮凝菌的分离、筛选及鉴定 16 附录一 微生物纯种分离、培养及接种技术 17 附录二 微生物的染色 19 附录三 纯培养菌种的菌体、菌落形态观察 21 实验一 显微镜的使用及微生物形态的观察 实验学时：2学时 实验类型：验证 实验要求：必修 一、实验目的 1．学习普通光学显微镜的使用方法（本实验学习低倍镜和高倍镜的使用）。 2．观察霉菌、酵母菌、放线菌、藻类的形态和构造。 二、实验器材 1．显微镜、载玻片、盖玻片等。 2．示范片 三、实验步骤 （一）显微镜的结构和各部分的作用 图8-1所示，是微生物检验常用的显微镜，其构造分机械和光学两部分。 机械部分主要包括： 1．镜筒 镜筒长度一般是160mm。它的上端装有接目镜，下端有回转板。回转板上一般装有3个接物镜。 2．载物台 载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔。使下面的光线可以通过。两旁有弹簧夹，用以固定标本或载玻片。有的载物台上装有自动推物器。 3．调节器 镜筒内旁有两个螺旋，大的叫粗调节器，小的叫细调节器，用以升降镜筒。调节接物镜与所需观察的物体之间的距离。 光学部分主要包括： 1．接目镜 一般使用的显微镜具有2～3个接目镜，其上常刻有“5×”、“l0×”或“15×”等数字及符号，意即使用时可放大5倍、l0倍或15倍。观察微生物时常用放大l0倍或15倍的接目镜。 2．接物镜 接物镜装在回转板上，可分低倍镜、高倍镜和油镜3种，其相应的放大倍数常是10、40、l00。通常显微镜的放大倍数等于接物镜与接目镜放大倍数的乘积。例如，用放大40倍的接物镜(高倍镜)与放大10倍的接目镜时所得的物象的放大倍数为40×10＝400，如果用放大15倍的接目镜则放大倍数为40×15＝600。接目镜装在镜筒上端，在使用过程中并不经常变动，所以通常所谓的低倍镜、高倍镜或油镜的观察主要是指使用不同的接物镜而言的。 油镜的放大倍数最大(100倍)。放大倍数这样大的镜头，焦距就很短，直径就很小，所以自标本玻片透过的光线，因介质密度(从玻片至空气，再进入油镜)不同，有些光线因折射或全反射，就不能进入境头，致使射入的光线较少，物象显现不清。所以为了不使通过的光线有所损失，须在油镜与玻片中间加入和玻璃折射率（n=1.52）相仿的镜油(香柏油， n=1.515)。因为这种接物镜使用时须加镜油，所以我们称它为油镜(图8—2)。一般的低倍镜或高倍镜使用时不加油，所以也称干镜。 使用低倍镜和高倍镜时，一般作活体的观察，不进行染色。在观察细小动物时，低倍镜主要用来区别动物的种类和看出它们的活动状态，而高倍镜则可看清动物的结构待征，低倍镜容易看到标本的全貌，油镜在大多数情况下是用来观察细菌染色的涂片。 3．集光器 集光器在载物台的下面，用来集合由反光镜反射来的光线。集光器可以上下调整，中央装有光圈，用以调节光线的强弱。当光线过强时，应缩小光圈或把集光器向下移动。 4．反光镜 反光镜装在显微镜的最下方至集光器。 （二）显微镜使用和保护的方法 1．低倍镜的使用法 (1)置显微镜于固定的桌几上，窗外不宜有障碍视线之物。 (2)拨动回转板，把低倍镜移到镜筒正下方，和镜筒连接而对直。 (3)拨动反光镜向着光线的来源处，同时用眼对准接目镜(选用适当放大倍数的接目镜)仔细观察，使视野完全成为白色，这是光线已经通到镜里的表示。 (4)把载玻片放到载物台上，要观察的标本放到圆孔的正中央。 (5)将粗调节器向下旋转，同时眼睛注视接物镜，以防接物镜和载玻片相碰。当接目镜的尖端距载玻片约0.5cm时停止旋转。 (6)把粗调节器向上旋转，同时左眼向接目镜里观察。如标本显出，但不十分清楚，可用细调节器调节，至标本完全清晰为止。 (7)假如因旋转粗调节器太快，致使超过焦点，标本不能出现时，不应在眼睛注视接目镜的同时向下旋转粗调节器，必须从第(5)步做起，以防因没有把握的旋转，使接目镜与载玻片碰触。 (8)在观察时，最好两眼都能同时睁开一面看一面画出所看到的物象。 2．高倍