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2018-03-13 发布于天津
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CN107090458-CN201710512319-酵母重组胶原蛋白

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107090458 A (43)申请公布日 2017.08.25 (21)申请号 201710512319.6 C07K 14/78(2006.01) A61L 26/00(2006.01) (22)申请日 2017.06.29 A61L 15/32(2006.01) (83)生物保藏信息 A61L 15/28(2006.01) CGMCC NO.14057 2017.04.21 C12R 1/84(2006.01) (71)申请人江苏悦智生物医药有限公司地址 213200 江苏省常州市金坛区华城中路168号 (72)发明人梁亮　张永正　 (74)专利代理机构常州佰业腾飞专利代理事务所(普通合伙) 32231 代理人高姗 (51)Int.Cl. C12N 15/12(2006.01) C12N 15/81(2006.01) 权利要求书2页说明书10页 C12N 1/19(2006.01) 序列表2页附图2页 (54)发明名称酵母重组胶原蛋白 (57)摘要本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种酵母重组胶原蛋白的生产方法，包括重组毕赤酵母工程菌构建及其无需甲醇诱导的组成型分泌表达重组胶原蛋白的方法。本发明首先在基因水平上利用毕赤酵母惯用密码子优化胶原基因序列并人工全基因合成，然后整合进酵母染色体中，构建成组成型分泌表达的重组毕赤酵母工程菌。发酵过程操作简便，产量高，且产物分离纯化简单；无需甲醇诱导，生产设备与厂房建设防火、防爆指标较低，生产环境环保无污染；无毒害物质使用，产品更安全。其携带的特异性亲和纯化标记，易于得到更高纯度的产品，可用于生物医 A 用原料。 8 5 4 0 9 0 7 0 1 N C CN 107090458 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种优化的人源Ⅲ型胶原蛋白片段的基因序列，其特征在于：基因序列如SEQ ID NO.1所示；优化的人源Ⅲ型胶原蛋白片段的基因序列是将天然胶原基因中的密码子替换成宿主惯用密码子而设计，并未改变天然胶原的氨基酸序列，然后通过全基因合成该序列，并在该序列前端引入Kex2蛋白酶酶切位点编码序列；所述宿主为酵母。 2.根据权利要求1所述的优化的人源Ⅲ型胶原蛋白片段的基因序列，其特征在于：所述 Kex2蛋白酶酶切位点编码序列如SEQ ID NO.2所示；将人源Ⅲ型胶原片段与Kex2蛋白酶酶切位点直接相连接，用于获取具有天然N端的胶原蛋白肽段。 3.含有权利要求1所述的优化的人源Ⅲ型胶原蛋白片段的基因序列的重组毕赤酵母工程菌的制备方法，包括以下步骤： (1)获得优化的