CN106990054-CN201710117697-一种基于多靶酶的丹参药材质量检测方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 106990054 A (43)申请公布日 2017.07.28 (21)申请号 201710117697.4 (22)申请日 2017.03.01 (71)申请人 浙江大学 地址 310013 浙江省杭州市西湖区余杭塘 路866号 (72)发明人 程翼宇　李振皓　 (74)专利代理机构 杭州天勤知识产权代理有限 公司 33224 代理人 胡红娟 (51)Int.Cl. G01N 21/31(2006.01) 权利要求书1页 说明书5页 (54)发明名称 一种基于多靶酶的丹参药材质量检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种基于多靶酶的丹参药材 质量检测方法，该方法包括：从丹参中提取丹参 提取物，用缓冲液溶解丹参提取物，得样品溶液； 取缓冲液，溶解能被丹参抑制活性的靶酶，得酶 溶液；将样品溶液和酶溶液进行混合、孵育，再加 入靶酶底物，进行反应，获得反应液，作为样品 组；以采用等量缓冲液替代样品溶液作为对照 组，测定样品组和对照组反应液的吸光度，通过 计算丹参样品对至少两种以上靶酶的抑制率判 断丹参药材的质量。本发明通过测定丹参对多种 靶酶的抑制程度，计算靶酶抑制率，并将至少两 种以上靶酶抑制率作为质控指标反映丹参药材 A 的质量，使质控指标与药品的临床疗效更相关， 4 能够更加快速、经济、高效、全面地评价丹参药材 5 0 0 的质量。 9 9 6 0 1 N C CN 106990054 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种基于多靶酶的丹参药材质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)丹参经甲醇水溶液超声提取后，获得丹参提取物，用缓冲液溶解丹参提取物，得到 样品溶液； (2)取与步骤(1)相同的缓冲液，溶解能被丹参抑制活性的靶酶，获得酶溶液； (3)将样品溶液和酶溶液进行混合、孵育，再加入靶酶底物，进行反应，得到反应液，作 为样品组； (4)采用等量缓冲液替代样品溶液，并重复步骤(2)、(3)，制得的反应液作为对照组，分 别测定样品组和对照组的反应液吸光度，通过计算丹参样品对至少两种以上靶酶的抑制率 判断丹参药材的质量。 2.如权利要求1所述的丹参药材质量检测方法，其特征在于，所述靶酶为凝血酶和血管 紧张素转换酶。 3.如权利要求1所述的丹参药材质量检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述提取的时 间为25～35min。 4.如权利要求1所述的丹参药材质量检测方法，其特征在于，所述靶酶为凝血酶时，缓 冲液采用pH值为6.5的磷酸盐缓冲液。 5.如权利要求1所述的丹参药材质量检测方法，其特征在于，所述靶酶为血管紧张素转 换酶时，缓冲液采用pH值为8.3的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液。 6.如权利要求1所述的丹参药材质量检测方法，其特征在于，所述孵育的时间为0.5～ 2h。 7.如权利要求1所述的丹参药材质量检测方法，其特征在于，所述靶酶为凝血酶时，靶 酶底物为S-2238；所述靶酶为血管紧张素转换酶时，靶酶底物为FAPGG。 8.如权利要求1所述的丹参药材质量检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述靶酶为凝 血酶时，反应液中的凝血酶终浓度为0.2～0.4U/mL，靶酶底物终浓度为0.2～0.4mM，样品终 浓度为0.2～2mg/mL。 9.如权利要求1所述的丹参药材质量检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述靶酶为血 管紧张素转换酶时，反应液中的血管紧张素转换酶终浓度为0.02～0.04U/m