Liu XH 实验一 显微镜的构造原理及使用PPT.ppt

Fluorescence image of epithelial cell, DNA in blue and Microtubules in green 荧光显微镜下的动物上皮细胞 5、使用方法 1．打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。 2．透射式荧光显微镜需在灯源与聚光器之间装上所要求的激发滤片，在物镜的后面装上相应的阻断滤片。落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发滤片／双色束分离器／阻断滤片的插块。 3．用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置，调整光源中心，使其位于整个照明光斑的中央。 4．放置标本片，调焦后即可观察。 使用中应注意：未装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤；用油镜观察标本时，必须用无荧光的特殊油镜；高压汞灯关闭后不能立即重新打开，需经5分钟后才能再启动，否则会不稳定，影响汞灯寿命。 （四）倒置显微镜Inverted microscope 组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，用于观察培养的活细胞。 优 点 集光器和载物台间的工作距离提高后，可放置培养、培养瓶等容器，直接对培养的细胞进行照明和观察。 * （五）激光共聚焦扫描显微境 (Laser confocal scanning microscope, LCSM) 种类 波长 氩氟激光（紫外光） 193 氪氟激光（紫外光） 248 氙氯激光（紫外光） 308 氮激光（紫外光） 337 氩激光（蓝光） 488 氩激光（绿光） 514 氦氖激光（绿光） 543 氦氖激光（红光） 633 激光种类及波长 * ? 用激光作光源，逐点、逐行、逐面快速扫描。 ? 能显示细胞样品的立体结构。 ? 分辨力是普通光学显微镜的3倍。 ? 用途类似荧光显微镜，但能扫描不同层次，形成立体图像。 优 点 * LCSM Image of a Xenopus Melanophore （爪蟾黑色素细胞 ）microtubule cytoskeleton (green) and the nucleus (blue) * 细胞生物学实验 刘小红 电话QQ：350783409 Email: 350783409@ 生命科学学科院 生物技术教研室 实验安排 实验一、显微镜的构造原理及使用方法 实验二、细胞凝集现象的观察 实验三、细胞膜的渗透性 实验四、叶绿体的分离及荧光现象的观察 实验五、线粒体的分离及观察 实验六、DNA的Fulgen染色法 实验七、植物细胞骨架的观察 实验八、RNA的Brachet反应 实验九、植物的组织培养 实验一 显微镜的构造原理及使用方法 一、普通光学显微镜 二、常见特殊显微镜 三、电子显微镜 一、普通光学显微镜Ordinary optical microscope （一）基本构造 （二）放大原理及光路图 （三）性能和质量 （四）使用方法 （五）使用注意事项 1、机械部分 （1）镜座 （2）镜柱 （3）镜臂 （4）镜筒 （5）转换器 （6）载物台 （7）调节器 2、照明部分 （1）反光镜 （2）聚光器 （3）光圈 3、光学部分 （1）目镜（5×，10×， 15×） （2）物镜（ 低：10×或 15×；高：40×或 45×；油 ：100×） （一）基本构造 普通显微镜的结构示意图（左：单目；右：双目） 1、 目镜； 2、镜筒；3、物镜转换器；4、物镜；5、通光孔；6、聚光器；7、光圈；8、反光镜；9、粗调节器；10；细调节器；11、镜臂；12、移片器；13、载物台；14、倾斜关节；15、镜柱；16、镜座；17、 标本移动器螺旋；18、灯室 细胞中期图片 左：低倍镜；右：高倍镜 （二）放大原理及光路图 （三）性能和质量 1、分辨率（resolution) 指能分辨出的相邻两个点间最小距离的能力。 r = 0.61λ / (n · sinα) r：分辨力； λ：照明光源的波长； n：介质的折射率； α：样品对物镜孔径角的半角； 0.61：恒定的参数。 注：n · sinα的量称为物镜的数值孔径，缩写为NA；r越小，则分辨率越高。要增大数值孔径，孔径角无法增大，只能增大介质的折高压率，这样就诞生了水浸物镜和油浸物镜，目前最大NA值可达1.4。 透镜的焦距 透镜的角孔径 2、放大率（magnification) 指最终成像的大小与原物体大小的比值。 总放大率 = 物镜放大倍数 ×目镜放大倍数 空气介质：可达1000倍 油介质（通常是香柏油）：可达1400倍 分辨本领 光源 透镜 是否需真空 光学显微镜 300 nm 可见光 玻璃透镜 否 200 nm (油） 可见光