中药重金属检测PPT.pptxVIP

中药中重金属检测研究进展;样品前处理;常用样品前处理方法;重金属检测技术;重金属检测技术;;;;;免疫法检测技术;重金属离子本身为小分子物质，不具备免疫原性和反应原性，不能直接免疫动物产生特异性抗体 金属离子带有电荷，能与生物分子发生不可逆反应导致动物中毒 免疫原性：刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞的能力 反应原性：与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的能力 既有免疫原性，又有反应原性的物质称为完全抗原 只有免疫原性，没有反应原性的物质称为半抗原 只有设计金属离子成为完全抗原，才能制备出单克隆抗体，进而建立重金属离子的免疫检测方法;前提工作;关键：寻找合适的络合物，即双功能螯合剂 目前常用的双功能螯合剂： 乙二胺四乙酸 （EDTA） 二乙烯三胺五乙酸 （DTPA） 载体蛋白： 血蓝蛋白（KLH） 牛血清白蛋白（BSA） 由于载体蛋白会刺激机体产针对其自身的抗体，为了减少干扰，筛选出重金属-螯合物特异性的抗体，需合成与其他载体蛋白（如卵清蛋白（OVA））偶联的复合物作为筛选用的检测抗原。;重金属离子的免疫检测;酶联免疫吸附法 (ELISA)技术;主要步骤;1. 单克隆抗体的制备;细胞融合及筛选： 免疫小鼠脾细胞+SP2/0 细胞(小鼠骨髓瘤细胞) 筛选阳性杂交瘤细胞株（即可产生抗体，又可在体外无限繁殖，但效价低） 腹水单抗的制备： 注射阳性细胞株细胞 ，10 d 后根据小鼠生长状况采集腹水。 离心取上清，得腹水单抗;2.单抗的鉴定;3.Cu(II)间接竞争ELISA检测方法的建立;;;4.间接竞争 ELISA 法与 ICP-AES 法的比较;小结;Thank You