第三章 紫外-可见光谱法3.ppt

以邻二氮菲为显色剂，采用标准曲线法测定水中微量Fe2+，实验得到标准溶液和样品的吸光度数据（见下表），试求得样品的浓度。 溶液 标准1 标准2 标准3 标准4 标准5 标准6 样品 浓度C/(10-5mol·L-1） 1.00 2.00 3.00 4.00 6.00 8.00 Cx 吸光度 A 0.113 0.212 0.336 0.434 0.669 0.868 0.712 实践训练4 解：以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标，绘制标准曲线，采用线性处理程序进行线性回归处理，得回归方程为：A=0.109×105C+0.0073, 相关系数r2=0.9994 标准曲线符合要求，将待测溶液吸光度代入回归方程，的试样浓度为: a，截距 b，斜率 相关系数，接近1线性好，0.999 Cx=(A-0.0073)/0.109×105 =(0.712-0.0073 )/0.109×105 =6.51×10-5 mol·L-1 * 掌握紫外-可见分光光度法的基本原理、定量分析方法，紫外-可见分光光度计的结构及各部件的功能； 熟悉紫外-可见分光光度法的实验技术及其应用； 了解紫外-可见分光光度法定性分析的方法原理。 第三章 湖南中医药高等专科学校 药学系药物化学教研室 蒋梅香 1 2 3 主要内容 紫外-可见分光光度法理论基础 紫外—可见分光光度计 实用分析技术 灵敏度高 准确度高 简便快速 应用广泛 不同的有机化合物可有不同的特征吸收光谱。 最低浓度达10-7-10-4g/ml的微量组分。 一般相对误差为0.2-0.5%。 操作简便快速，仪器设备不复杂，有利于多种元素的同时测定。 紫外-可见分光光度法的特点 第三节 定性与定量分析方法 一、定性分析方法 1.鉴别化合物的真伪： 对象：纯净的有机化合物； 依据：每一种化合物都有其特征吸收谱带，不同化合物有不同的吸收光谱。 方法： （1）与标准品或标准图谱对照 （2）对比吸收光谱特征数据：λmax，ε λmax。 “吸收最大，干扰最小” A ? X ?max Y 测定条件的选择 1.测定波长的选择 浓度测量的相对误差与T(或A)的关系 吸光度A在0.2～0.7范围时，测定结果的相对误差较小，为测量的最佳区域 (调c, L, ?) 10 8 6 4 2 0 20 40 60 80 0.7 0.4 0.2 0.1 A T% Er (36.8) 0.434 最佳值 最佳读数范围 2.吸光度范围的选择 误差最小的一点是T=36.8%，A=0.434 第三节 定性与定量分析方法 一、定性分析方法 （1）与标准品或标准图谱对照 将样品和标准品用相同溶剂配制成相同浓度的溶液，在同一条件下分别绘制其吸收光谱，比较吸收光谱是否一致。 如：布洛芬 第三节 定性与定量分析方法 一、定性分析方法 （2）对比吸收光谱特征数据：λmax，ε λmax。 如：地西泮 第三节 定性与定量分析方法 一、定性分析方法 鉴别化合物的初步判断： ①若化合物在210~250nm有强吸收带，则可能含有共轭双键； 若在260~300nm有强吸收带，则表明含有3个共轭双键； 若强吸收带进入可见光区，表示为稠环芳烃； ②若化合物在250~300nm有中强吸收带，则表示有苯环； ③若化合物在270~350nm有弱吸收带，则表示有含n电子的简单非共轭生色团，如羧基、硝基； 第三节 定性与定量分析方法 一、定性分析方法 2.杂质检查： 对象：检查杂质的有无或限量； 依据：纯化合物的吸收光谱与含有杂质的吸收光谱有差别。 如：肾上腺素的酮体检查 续前 2．杂质限量的测定： 例：肾上腺素中微量杂质——肾上腺酮含量计算 2mg/mL -0.05mol/L的HCL溶液，λ=310nm下测定 规定 A310≤0.05 即符合要求的杂质限量≤0.06% (1) 吸光系数法 (2) 标准曲线法 (3) 对照法（外标一点法） 二、定量分析方法 1.单组分样品的定量方法 第三节 定性与定量分析方法 吸光系数法 已知L和吸光系数ε或 ，根据测得的A，求被测物的浓度的方法，又称绝对法。 如：维生素B12 1.单组分样品的定量方法 第三节 定性与定量分析方法 练习 例：维生素B12 的水溶液在361nm处的百分吸光系数为207，用1cm比色池测得某维生素B12溶液的吸光度是0.612，求该溶液的浓度 解： 练习 例：精密称取B12样品25.0mg，用水溶液配成100ml。精密吸取10.00ml，又置100ml容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在1cm的吸收池中，于361nm处测定吸光度为0.507，求B12的百分含量？ 解：