透析袋的使用.doc

?透析袋的使用??透析技术自Thomas?Graham?于1861年发明到现在已有一百多年的历史，它已成为生物化学实验室最简便，最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中，去除盐、少量有机溶剂、小分子杂质、样品浓缩和改变微量样品的缓冲系统等都要用到透析技术。 ????生物样品的透析只需使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内，浸入水或缓冲液中，样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子等物质不断扩散透析到袋外，直到袋内、外两边的浓度达到平衡。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”，袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。 透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜两边的溶质浓度梯度形成的。透析的速度同欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度、膜的面积和温度成正比，与膜的厚度成反比。升高温度可加快透析速度。为最大限度地保持生物大分子的活性，通常采用4透析。 ????透析膜可用动物膜和玻璃纸等，但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜。目前较常用的是美国Union?Carbide?（联合碳化物公司）和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管，其截留分子量MwCO（即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量，缩写为MwCO）通常从700到数万不等。 ????商品化的透析袋可制成管状，其扁平宽度为6～50?mm不等。为防干裂，出厂前一般都经10％的甘油处理，透析袋中含有微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，它们对蛋白质和其它生物活性物质有害，用前必须除去。新购进的透析袋必须经过处理才能使用。50％的乙醇煮沸1小时，再依次用50％乙醇、0.01?mol/L碳酸氢钠和0.001?mol/L?EDTA溶液洗涤，再用蒸馏水冲洗后即可使用。实验证明，50％乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效。使用后的透析袋洗净后可存于蒸馏水中，置4保存。若长时间不用，可加入适量的叠氮钠（NaN2），以抑制微生物的生长。干的透析袋弯折时易出现裂口，用时必须仔细检查。 ????经过处理的透析袋，使用时，一端用橡皮筋或线绳扎紧，也可以使用特制的透析袋夹夹紧，由另一端灌满蒸馏水，用手指稍加压，检查是否漏液，确证无误后，再用蒸馏水洗净，方可装入待透析样品。装入样品时通常要留三分之一至一半的空间，以防透析过程中，因透析样品中的小分子浓度较大，袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时，体积增加是正常的，有时甚至可达50％以上。透析可以使用烧杯、量筒和塑料桶等容器，容器的大小以20-50:1为宜。少量样品溶液的透析，可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。 ????通常为了把握透析效果，有时需要对透析液中欲去除的小分子残留物进行分析，如甘氨酸、二甲基甲酰胺、甲醛、戊二醛、碳酸根、偶联剂等。小分子残留物的检测分析方法很多，如?(NH4)2SO4可用1％的BaCl2检查，NaCl、KCl等可用1％的AgNO3?检查。有些检测方法比较复杂，或需要一定的条件，如确有必要可参考相关文献资料。 ????为了加快透析速度，提高透析效率，除及时更换透析液外，还可使用磁力搅拌，还可以使用各种透析装置。使用者也可以自行设计与制作各种简易的透析装置。美国生物医学公司（Biomed?Instruments?Inc.）生产的各种型号的Zeineh?透析器，由于使用对流透析的原理，使透析速度和效率大大提高。? 附：透析袋的处理 ?1.?根据需要，把透析管剪截成适当长度（10—20cm）。 ?2.?在大体积的2%（w/v）碳酸氢纳和1mmol/L?EDTA(pH8.0)中将透析管煮沸10分钟。 ?3.?用蒸馏水彻底清洗。 ?4.?于EDTA(1mmol/L，pH8.0)中煮沸10分钟，? ?5.?或将透析管置盛有蒸馏水的烧杯内，高压蒸汽灭菌10分钟。 ?6.?冷却后，存放于4。透析管必须确保始终浸于溶液中。 ?7.?从此时起取用透析管时总须戴手套。 ?8.?用前将透析管用蒸馏水清洗干净后即可使用