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第二章 第一节DNA复制 中心法则：遗传物质在细胞周期中通过复制产生子代DNA，经细胞分裂而传递给子代细胞，或者经包装产生子代个体，从而将遗传信息传递给子代细胞或个体。 DNA复制的基本特征 半保留复制 半不连续复制 参与DNA复制的酶和相关蛋白 1、DNA解链酶（helicase） 是通过水解ATP获得能量来解开双链DNA的一类酶的总称。其中有的参与DNA的复制，有的参与DNA的重组、修复等非复制过程。 2、单链结合蛋白（single-strand binding protein, SSB)诸如真核生物中的复制因子A（RF-A)这类蛋白质，与DNA单链相结合，既防止核酸酶的水解又避免DNA单链重新构成双链，还可使其前端的双螺旋的稳定性降低，易于双链的解开。原核生物SSB结合表现为协同效应，如第一个SSB结合能力为1，则第二个结合力可高达103 ，而真核生物的SSB无此效应。 3、拓扑异构酶（topoisomerase） 前已述及，其中I型的有大肠杆菌的拓扑异构酶I、III,真核生物的DNA拓扑异构酶I；II型的有大肠杆菌的拓扑异构酶IV、噬菌体（T4)、真核生物的DNA拓扑异构酶II. 4、DNA 聚合酶是以DNA单链为模板，以dNTP为底物，合成子代DNA链的酶，在DNA复制和修复中起作用，须Mg2+激活，并存在提供3`-OH末端的引物链。 5、引物酶(primase) 以DNA单链为模板，以NTP为底物合成寡核苷酸引物的酶，是DNA指导的RNA聚合酶。 6、DNA连接酶（ligase) 是封闭新合成链上去处引物并由DNA聚合酶I填补缺口后留下的缺口，催化DNA复制的最后步骤。 三、DNA复制的基本过程 1、引物合成是DNA合成起始所必需的，由RNA引物起始；由切口起始；由蛋白结合DNA末端的单核苷酸起始均可为DNA聚合酶提供3’-OH端，从而起始DNA的合成。 DNA 合成是在3’-OH末端添加dNTP 复制的基本单元——复制子(Replicon)及复制方向 复制子(Replicon): 基因组中DNA复制的单元; 包含有用于复制起始的复制起点(origin) 和用于复制终止的终点。 几乎所有的原核生物染色体、许多噬菌体和病毒DNA 分子都是环状的并且都由单一复制子组成（single replicons）线性病毒DNA 分子只有一个复制起点。 真核生物的染色体有 多复制子（Multiplereplicons）, 每个复制子有其自身的复制起点. 哺乳动物细胞在50-200 kb长的DNA上约有5-10万个复制子。 有半保留复制 有半不连续复制，存在冈崎片段（Okazaki fragment） 复制小体(Replisome): 用于DNA合成时存在于复制叉上的多蛋白复合结构. 包括DNA 聚合酶和引物酶及其他酶类。 环状DNA的复制：θ型、滚环型、D-环型 细菌DNA的复制 复制起始: 蛋白顺序结合于复制起始区用于引物合成。 解旋：是在topoisomerase II 或称为DNA 旋转酶的作用下，解开螺旋产生DNA部分单链的过程， Gyrase 是抗生素作用的靶位点。 参与复制的起始主要结构 a. oriC 包含四个9 bp 的与起始蛋白DnaA结合的位点.DnaA 的合成与增长速率相关， 因此复制的起始也与增长速率相关. b. DnaA 由30-40 个分子构成复合物, 其利于三个13 bpAT-rich 重复序列的解链，从而有利于DnaB 的结合. c. DnaB 利用ATP水解释放的能量使DNA双链解开的解链酶。 d. SSB(single-stranded binding protein) 结合在解开链的DNA上(ssDNA bubble). e. DNA 引物酶： 装载用于合成前导链中的短RNA引物. f. 引发体: DnaB 解链酶和DNA 引物酶构成的复合体，进行DNA复制的起始。 2、延伸 a. DNA polymerase III holoenzyme (全酶):二聚体复合物, 一半合成前导链，一半合成后随链. b.确保双链以相同的速率进行合成。 c. 每个单体都含有一个a-subunit (亚单位)---行使酶的功能，e-subunit---3’?5’ proofreading (校正) exonuclease (核酸外切酶) ，b-subunit---clamp（夹住） 聚合酶与DNA不同物种中其他的亚单位各不相同. d. RNA 引物的去除及DNA pol I填补空缺 e.冈崎片段是通过DNA 连接酶来连接的. 缺口平移：可以用来在体外介导带有标记性的脱氧核糖核苷酸进入DNA，产生标记探针. 3.终止和分离 终止区大约在oriC复制起点相对的180°位置上.Topoisomerase IV 解开连