延边烤烟叶片生长发育组织学规律研究1.doc

延边不同烤烟品种下部叶生长发育组织结构研究 1 立项背景及研究意义 成熟度是烤烟烟叶生产的核心，是影响烟叶质量，特别是香气量和香气浓度的重要因素。它反映着烟叶内各种化学成分的含量、比例等的变化程度，极大地影响着烟叶的色、香、味以及化学性质、物理性状、吸食质量、使用价值等，也是保证和提高烤后烟叶品质和外观质量的前提[1]。朱尊权曾指出，在烟叶等级划分的诸因素中，实质上是以成熟度为核心，以叶片结构、色度为重点[2]。目前我国东北生产的烟叶成熟度普遍不够，导致烟叶香气风格不突出、香气量少、杂气和刺激性大、内在成分不协调。正确掌握和判断烟叶的成熟度，采收真正成熟的烟叶，是提高烟叶质量、增加经济效益的重要途径之一。 烤烟叶片形态结构直接反映了叶片组织结构的发育状况、营养状况、烟叶的疏松程度和成熟特[3]等，与烟叶的最终质量密切相关，因此有必要了解叶片发育过程中组织结构和细胞结构的变化过程[4] ，从微观上确定烟叶的成熟度，以此确定烟叶的最佳采收期。田间判定烟叶成熟，在很大程度上是依据叶色。随着叶片的生长、成熟，叶色亦随之变化。叶色的变化，不仅受叶龄、积温的影响，而且还受气候、施肥、密度、土壤水分、田间管理等诸多因素的影响[5] ，所以单凭叶色的变化还不能全面反映烟叶正常的成熟情况。前人主要从叶绿素含量[6]、外观特征[7-8]等方面对烟叶的成熟状况进行研究，而关于依据叶片组织结构确定成熟度的研究较少。 由于烟叶的最终质量与烤烟大田期叶片的组织结构变化有着密切的关系,因此有必要了解大田期烟叶主要组织结构的变化过程,并在栽培措施上进行调节和控制。 以往许多对烤烟叶片组织结构的研究主要集中在栽培技术措施方面[9-13]。因此，我们对东北延边烟区下部叶生长发育规律进行了进一步的研究，在田间条件下对烤烟三个品种的下部叶片在成熟过程中栅栏组织厚度、海绵组织厚度、栅栏与海绵组织厚度比值等3 个叶片组织结构特性的变化进行了分析。主要通过组织切片途径来比较延边不同烤烟品种下部叶的成熟规律。以期为制订合理的栽培技术措施提供理论依据。 1.1实验材料 试验于2011年在吉林省敦化市雁鸣湖镇杨木村进行。土壤类型为粘壤土,质地为暗棕壤,土层深厚。地势从北到南颇缓,为山脚下地形。田头有机井，排灌方便,前茬作物为烟草。以延边地区适宜种植的3个烤烟品种（吉烟9号、9407、JZ7-07(待审定)）为试验材料，采取低起垄、深栽烟、二次培土的栽培措施,5 月15日移栽, 三角定苗。肥料为烟草专用肥（N:P:K=8:10:23）、硫酸钾（K2O=52%）和硝酸磷（N=26.5%, P2O5=11.5%），施肥方法：氮、磷、钾肥的50%开沟条施作基肥，50%作穴肥。其他管理同当地常规。 1.2试验设计 1.叶片组织发育规律研究 返苗后，选择试验田中生长发育一致的90株烟，挂牌标记，按下部叶（第5—7片可收叶）取样。 从叶长10cm开始取样，取10，20，30，40，50定长，成熟。并分别测量每片叶的长、宽，记录叶龄。 取样标准：10cm前取整片叶，从10cm起取叶片第6—8条侧脉间的叶肉组织。 取样大小：0.5cm×1cm,含有一个小支脉，取样同时记载所取叶片的长、宽、叶厚、叶龄和取样时间，每次取3株烟。取样后立即用FAA固定液固定并保存。 2. 具体操作步骤: 实验工具：小药瓶，大小针管，刀片，载玻片，培养皿，保温盒，毛巾，卷尺，胶带，皮筋等 操作步骤： 先在冰箱内冻一定量冰块，放于保温盒中，以保持保温壶低温，防止戊二醛固定液氧化变质。将固定液先装入小药瓶中，每瓶约3mL。用毛巾包上小药瓶放入保温盒中。在培养皿中冻上冰块。 取样时，将载玻片放于培养皿中的冰块之上。左手拖住培养皿，将生长在烟叶上的叶片放在载玻片上，右手用刀片迅速切下一个长方形方块，约0.5cm×1.5cm于载玻片上。然后，将培养皿放在保温盒上或者一个固定的平面上，并迅速用针管抽取少量戊二醛固定液，滴在叶片样品之上。左右手各拿着一把刀片，用对拉法从叶片样品上切下一个小块约1㎜×2㎜，用刀片将小叶片轻拨入事先盛有固定液的小药瓶中，剩下的大块叶片放入事先装有FAA固定液的小药瓶中。再进行此操作，取完所有重复后，盖上瓶盖，并迅速用大针管抽戊二醛固定瓶中的气体，直到叶片悬浮于固定液中或沉入瓶底，然后抽取FAA固定瓶中的气体直到叶片悬浮于固定液中或沉入瓶底。紧接着再在进行下一个处理的取样工作。 注意事项 取样前，应先到试验田内，选择生长一致的烟株，确定叶位。 取样时，放入保温盒的小药瓶不应与冰块直接接触，防止药瓶中固定液上冻，破坏烟叶组织。可用毛巾包着放入。 取样时，切忌用手或者刀片等按压叶片样品，否则易破坏叶肉细胞结构。 整个取样过程应迅速，快捷。叶片取下后，应迅速滴下戊二醛固定、切片，以免