分子实验室主要试剂配制.doc

一、Hank’s液配方： KH2PO4 0.06g， NaCl 8.0g， NaHCO3 0.35g， KCl 0.4g， 葡萄糖1.0g， Na2HPO4·H2O 0.06g， 加H2O至 1000ml 注：Hank’s液可以高压灭菌。4℃下保存。 二、磷酸盐缓冲液(PBS)的配制 母液的配制： 0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水 0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水 各种浓度PB(pH=7.4)的配制： 先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L 的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。 然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如： 0.1M PB（PH=7.4）：取500ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。 0.01M PB（PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。 0.02M PB（PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至1000ml 即可。 若需要NaCl的话，加入NaCl至0.9%（g/100ml）即可。 三、胰蛋白酶溶液的配制 配制胰蛋白酶时，要注意药品的牌号，活性及保存时间。不同的牌号、质量会有差别，更重要的应注意酶的活性。配制时，应按所标活性(一般活性为1：250)配制最适浓度的溶液。 配制方法下： 0．25％胰蛋白酶(活性1：250)溶液的配制： 1：250 胰蛋白酶 0.25g Hank 液 100ml 配制时，先用少量Hank 液溶解胰蛋白酶，然后再将余液加入。置于370C 水浴中，溶解lh(时间长短取决于溶解程度，待溶液全部透彻清亮为止)。溶解后，用除菌滤器过滤，无菌分装，密封，贴好标签，置于低温冰箱(-20℃)保存。使用前，用7.4％NaHCO3 调PH 至7.6-7.8。 四、0.25％胰蛋白酶-0.02％EDTA混合消化液 ??? 胰蛋白酶(Trypsin)粉???????????????? 0.25g ??? EDTA粉???????????????????????????? 20.0mg ??? 0.01mol／L PBS????????????????????? 100ml 先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37℃水浴中1小时左右(待彻底溶解，液体呈透明为止)，用滤器过滤，分装置-20℃冰箱中保存。 五、青(100单位／m1)-链霉素(0.1mg/ml)的配制 配制时，将上述两种药品溶解于生理盐水(或Hank 液)100ml 中。然后用除菌滤器过滤(或在无菌间内，用灭菌的盐水配制亦可)，分装于青霉素瓶中，放冰箱(或-20℃)保存，备用。 使用时，可按100单位/m1 稀释。 青霉素：80万单位／m1一瓶用培养液8ml稀释，备用。 链霉素：1g一瓶用培养液2ml稀释，备用。 保存：4℃或-20℃保存。 500ml培养液加入以上配好的0.5ml青霉素，0.1ml链霉素。 六、0.5％台盼蓝染液的配制 台盼蓝0.5g，溶于100mlPBS液中。待溶解后，过滤以去除不溶解的杂质。 检查细胞活力时，取20ul细胞悬液加20ul台朌蓝染液，3～5分钟后观察及用计数板计数，此时，活细胞透明无色，死细胞被染成均匀蓝色，但不得超过15min。 七、血清灭活 1、从冰箱中取出血清瓶，放入装有清水的盆中，放入4度冰箱中自然融化； 2、融化后尽快把血清瓶放入56℃水浴中，水面超过血清面约1～2cm； 3、每5分钟晃动血清瓶，摇匀血清。灭活30分钟后，取出血清，放入冷水浴中复温。冻存于-20℃或分装后冻存。 注：血清必需先经灭活补体后才能使用。血清在-20度可保存1～2年。