专升本电泳技术.ppt

电泳技术 李莉  一、定义  电泳(electrophoresis)—带电粒子在直流电场中向所带电荷相反的电极移动的现象。 电泳分析技术—利用电泳现象进行物质分离及分析的技术。 二、电泳分析技术发展概况 1809年 发现电泳现象 1937年 Tiselius 自由界面电泳 1948年 Wieland 滤纸电泳 1980’s 毛细管电泳 (capiliary electrophoresis) 三、电泳分析技术的分类 1.根据被分离样品的量多少 分析电泳 制备电泳 2.根据电泳电压的高低 常压电泳 0～500 V 高压电泳 500～3000V 3.根据电泳中是否使用支持物 自由电泳—不使用支持物，在溶液中进行。 稳态电泳—一定时间后达到稳态 区带电泳—使用支持物 (1) 按支持物的物理性状不同，可分为 ①滤纸及其他纤维薄膜电泳，如醋酸纤维素等 ②凝胶电泳，如琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳 ③粉末电泳和丝状电泳 (2)按支持物的装置形式不同，可分为 ① 平板式电泳 ②?垂直板式电泳 ③ 垂直柱式电泳 4.根据电泳系统pH是否连续 连续pH电泳—指电泳过程中pH保持不变，如滤纸电泳、醋纤膜电泳 不连续pH电泳—指电极缓冲液和(或)电泳支持物的不同区段有不同的pH，如 PAGE、IFE 电泳技术的特点: 凡是带电物质均可应用某一电泳技术进行分离,并可进行定性或定量分析; 样品用量极少; 设备简单; 可在常温进行; 操作简便省时; 分辨率高. 电泳技术应用 基础理论研究; 临床诊断; 工业制造. 四、电泳的基本原理 一个质点，如能解离或能吸附带电质点，在电场中便会向正极或负极移动。 以蛋白质分子为例: F= EQ （Q：有效电荷，E：电位梯度） F’=6?r?v （F’：摩擦阻力，v：在介质粘度η中半径为r的颗粒的移动速度） F=F’ EQ=6?r?v 迁移率（Mobility)——带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度。 V Q M== E 6?r? 五、影响电泳速度的因素 1.电场强度（E） E↑→电流↑→热效应→支持介质上的水分蒸发→样品的热变性 E↓→电泳速度慢→延长电泳时间→样品扩散→区带模糊不清→分辨率下降 2.离子强度（I） 溶液的I 越高，质点的泳动速度越慢，但区带分离度却较清晰。 I↑→缓冲能力越大→缓冲液所载的分电流增加，而样品所载的电流相应减少→电泳速度减慢 一般:0.02~0.2M 3.缓冲液的pH pH值决定了化合物解离的程度，也决定了质点所带的净电荷。 4.电渗（electro-osmosis）——指在电场作用下液体相对于固体支持物的相对移动。 +++++++++ ————— ————— +++++++++（液） 负极 ← →正极 5.分子筛 在凝胶电泳中，分离蛋白质等物质除了利用所带电荷的差异的效应外，还利用了其分子量的不同及形状不同。 醋 酸 纤 维 薄 膜 电 泳Cellulose acetate membrane electrophoresis，CAME 一、醋酸纤维素 ????? 是纤维素醋酸酯，由纤维素的羟基进行乙酰化后制得，将它溶于有机溶剂涂抹成均匀的薄膜，待有机溶剂挥发后，即为白色不透明的醋酸纤维薄膜。 厚度：0.15mm 二、特点 1.吸附作用小 2.电渗作用小 3. 需加样量少 4. 吸水性差 血清蛋白质各组分的相对分子重量及等电点 三、影响醋纤电泳结果的因素 1.? 电泳图谱不齐 2. 电泳图谱分离不清 3.? 电泳速度过慢 4.? 清蛋