第四章-蛋白质结构解析.pptVIP

一般由高速电子撞击金属产生。如图所示，是一种产生X射线的真空管，K是发射电子的热阴极，A是由钼、钨或铜等金属制成的阳极。两极之间加有数万伏特的高电压，使电子流加速，向阳极A撞击而产生X射线。 核磁共振成像 基本原理：是将人体置于特殊的磁场中，用无线电射频脉冲激发人体内氢原子核，引起氢原子核共振，并吸收能量。在停止射频脉冲后，氢原子核按特定频率发出射电信号，并将吸收的能量释放出来，被体外的接受器收录，经电子计算机处理获得图像. 核磁共振测深 　　核磁共振测深是MRI技术在地质勘探领域的延伸，通过对地层中水分布信息的探测，可以确定某一地层下是否有地下水存在，地下水位的高度、含水层的含水量和孔隙率等地层结构信息。 　　 蛋白质或多肽是由氨基酸通过肽键连接而成的具有特定结构的生物大分子，主要的光学活性生色基团是肽链骨架中的肽键、芳香氨基酸残基及二硫键，另外，有的蛋白质辅基对蛋白质的圆二色性有影响。 蛋白质的圆二色性主要由活性生色基团及折叠结构两方面圆二色性的总和。根据电子跃迁能级能量的大小，蛋白质的CD光谱分为三个波长范围: 1）250nm以下的远紫外光谱区，圆二色性主要由肽键的n→π*电子跃迁引起；远紫外CD主要应用于蛋白质二级结构的解析 2）250～300nm的近紫外光谱区，主要由侧链芳香基团的π→π*电子跃迁引起；近紫外CD主要揭示蛋白质的三级结构信息 3）300～700nm的紫外-可见光光谱区，主要由蛋白质辅基等外在生色基团引起。紫外-可见光CD主要用于辅基的偶合分析。 肽键是高度有规律排列的，其排列的方向性决定了肽键能级跃迁的分裂情况。具有不同二级结构的蛋白质或多肽所产生CD谱带的位置、吸收的强弱都不相同。因此，根据所测得蛋白质或多肽的远紫外CD谱，能反映出蛋白质或多肽链二级结构的信息，从而揭示蛋白质或多肽的二级结构。 α-螺旋结构在靠近192nm有一正的谱带，在222和208nm处表现出两个负的特征肩峰谱带；β-折叠的CD光谱在216nm有一负谱带，在185～200nm有一正谱带；β-转角在206nm附近有一正CD谱带，而左手螺旋P2结构在相应的位置有负的CD谱带，如上图和表所示。 CD数据拟合计算蛋白质的二级结构的方法基本原理是假设蛋白质在波长λ处的CD信号θ(λ)是蛋白质中或多肽各种二级结构组分及由芳香基团引起的噪音的线性加，θ(λ)= Σfiθ(λ)i + noise。θ(λ)i是第i个二级结构成分的CD信号值，fi为第i个二级结构成分的含量分数，Σfi规定值为1；通过已知蛋白（或称参考蛋白）二级结构的圆二色数据库，曲线拟合未知蛋白或多肽的圆二色数据，估算未知蛋白或多肽的二级结构。 蛋白质或多肽的二级结构拟合计算方法中，主要采用多聚氨基酸为参考多肽。Greenfield 等采用多聚L-lys 作参考多肽，建立α-螺旋、β-折叠及无规卷曲等二级结构参考CD 光谱曲线，采用单一波长法（208nm）计算出α-螺旋含量后，然后假设不同的β-折叠含量（Xβ）值，并假设CD 值是α-螺旋含量(XH)、β-折叠含量(Xβ)无规卷曲(XR)三者贡献值的加和，即： XH+Xβ+XR=1 通过计算得到不同波长的θ(λ)，得出计算曲线。假设一些不同的Xβ值，分别求出它们相应的计算曲线，找出与实验曲线最接近的曲线，相应于该最接近曲线的Xβ及XR即认为是该蛋白质的相应结构含量。 质谱中主要出现的离子有四种，即分子离子、碎片离子、同位素离子和亚稳离子 分子离子 分子在离子源中失去一个电子形成的离子，在质谱图中，分子离子对应的峰称分子离子峰。 特点： 分子离子含奇数个电子，分子离子峰出现在质谱图的最右侧。 作用： 根据分子离子的质荷比可确定分子量及分子式。 碎片离子：分子离子中的某个化学键断裂而形成的离子，有些碎片离子获得能量，会进一步裂解成更小的碎片离子。 特点：m/z较分子离子小，碎片离子峰出现在分子离子峰的左侧。 作用：反映分子的结构信息。 亚稳离子：离子受电场加速后，在飞行途中碎裂而产生的离子，其对应的峰称为亚稳峰。 特点　① 峰弱，强度仅为m 峰的1%～3%。　② 峰钝，一般可跨2～5个质量单位。　③ m/e一般不是整数，与母离子和子离子有下述关系：　　　　　　　　　　　　m* ＝m22 /m 1 用途　 可以确定离子的亲缘关系， 有助于了解裂解规律， 解析复杂图谱。　 　例：对氨基茴香醚在m/z 94.8和59.2处，出现两个亚稳离子峰（如图），