(精选)抗生素微生物检定法课件.ppt

第二章 抗生素微生物检定技术第二节 概述;2、抗生素的命名：现没有统一的命名方法，基本遵守三条规则：（1）动植物或菌类产生的抗生素，根据动物学、植物学或菌属的名称而定。如：青霉素、链霉素、灰黄霉素等； （2）抗生素的化学结构或性质已经明确了的可根据其族命名。如：四环素、氯霉素等； （3）对一些有纪念意义的或按抗生素产生菌的发现地命名及习惯上已采用俗名的，如：土霉素、平阳霉素等。 二、抗生素的分类 （一）按来源分： 1、细菌产生的：主要有杆菌肽、多粘菌素等； 2、真菌产生的：主要有青霉素、头孢菌素、灰黄霉素等； 3、放线菌产生的：主要有链霉素、四环素类、红霉素、庆大霉素等。;（二）按抗生素的作用对象分类： 1、抗革兰氏阳性菌的：如，青霉素、林可霉素、克林霉素、万古霉素、新霉素等； 2、抗革兰氏阴性菌：主要有链霉素、多粘菌素E等； 3、广谱抗生素：如，四环素类、红霉素、氯霉素、卡那霉素、头孢菌素类等； 4、抗真菌类：主要有制霉菌素、灰黄霉素、两性霉素B等； 5、抗肿瘤类：主要有平阳霉素、柔红霉素、放线菌素D、阿霉素等； 6、抗病毒及抗原虫类：主要有抗病毒霉素、曲古霉素、巴龙霉素等； 7、抗结核分枝菌类：主要有链霉素、环丝氨酸、利福霉素等。;（三）按抗生素化学结构分类： 1、β-内酰胺类抗生素：如青霉素类、头孢菌素类及其衍生物。 2、四环素类抗生素：如四环素、土霉素、金霉素及其衍生物。 3、氨基糖苷类抗生素：如链霉素、新霉素、卡那霉素、庆大霉素、巴龙霉素等。 4、大环内酯类抗生素：如红霉素、柱晶白霉素、螺旋霉素、罗红霉素、阿霉素等。 5、多烯类抗生素：如制霉菌素、两性霉素B、曲古霉素等。 6、多肽类抗生素：如多粘菌素、杆菌肽、卷曲霉素等。 7、苯羟基胺类抗生素：如氯霉素、甲砜氯霉素、已酞氯霉素等。 8、蒽环类抗生素：如柔红霉素、阿霉素、紫红霉素等。 9、其他抗生素：如磷霉素、环丝霉素、硫霉素等。;四、抗生素微生物检定用标准品 抗生素微生物效价测定用的标准品，是具有一定物理化学性质及一定的生物活性的物质。分为国家标准品或暂行标准品。国家标准品是使用时间较长而又成熟的抗生素，暂行标准品是新的抗生素。国家标准品由中国药品生物制品检定所统一制备管理。 五、抗生素微生物检定法 可分为：稀释法、浊度法、扩散法;;;;;;;;;;管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法[1]，利用管碟法测定抗生素效价，具有准确、直观、重复性好等优点，因而被广泛采用。但是整个试验过程中影响结果的因素很多，任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差，导致整组试验失败。根据实际操作中的积累经验，对管碟法中影响试验结果的因素进行如下分析及提出解决的方法。 ? 1. 实验器材的准备 1.1 实验器材的选择 试验应该选择底面平整的玻璃双碟，避免底面的凹凸影响琼脂层的厚度。可将双碟放置在水平台上，下垫一层白纸，加入3mL水，再滴加蓝墨水，根据蓝色是否深浅一致来判断双碟底面平整程度。牛津杯则应该选择加工精细的同一批产品，这样才能保证管壁厚薄与重量均匀一致，使得牛津杯在培养基中下陷相同的深度，抗生素溶液扩散均匀有可比性。如果牛津杯两端不够平，就应予剔除，否则会使抗生素溶液漏出，破坏均匀扩散现象。 1.2 实验器材的清洗 抗生素试验中，玻璃双碟、牛津杯往往会连续使用。由于清洗方面的原因，它们还是容易残留上次试验中的抗生素（庆大霉素、争光霉素、链霉素等）或者被清洗用的杀菌剂（如新洁而灭、洗洁精、去污粉等）污染，以至于在下次试验中造成抑菌圈不正常的现象。因此，在清洗时要尤为注意多用流水冲洗。160℃干热灭菌2h后备用。?;2. 配制试验所需的样品、标准品、缓冲液与培养基 2.1 样品与标准品溶液的配制 标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。供试品应放于干燥器内至少30min方可称取。称量最好为一次取样称量，动作迅速，不得反复称取，取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免吸水。标准品的称量最好用1/100,000克的分析天平，样品称量不得低于1/10,000克的分析天平。天平中的干燥剂应保持经常注意更换。称量结束后，加入超声波处理后的磷酸缓冲液，定容至刻度，过滤并稀释。稀释时，都应采用容量瓶，每一步稀释取样量不得少于2mL。用刻度吸管吸取溶液前，要用待稀释液冲洗吸管2～3次，吸取溶液后，要用滤纸把刻度吸管外壁多余液体擦去，再从起始刻度开始放溶液。把稀释后的抗生素溶液分装至干燥灭菌试管待用。在称量抗生素样品过程中，操作者的工作服上有可能会沾染抗生素粉末，在配培养基、加底层培养基、加菌层培养基或滴加抗生素溶液时，会随衣袖的抖动落入培养基，造成破圈或者无抑菌圈。所以配制抗生素溶液应单独使用一套工作服。 2.2 培养基与缓冲液的配制 配制培养基与缓冲液时要按照文献的配比用量，配制后调节其pH