酶工程制药技术_S1.pptVIP

第四章 酶工程制药技术 酶工程简介（Enzyme Engineering） 酶工程是酶学和工程学相互渗透结合、 发展而形成的一门新的技术学科。它是从 应用的目的出发研究酶、应用酶的特异催 化性能，并通过工程化将相应原料转化成 有用物质的技术。 酶工程制药主要包括药用酶的生产和酶法制药两方面的技术。 酶工程制药 药用酶：具有治疗和预防功效的酶 生产方式： 微生物发酵 植物、动物细胞培养 提取与分离纯化技术 酶分子修饰技术 酶法制药：利用酶的催化特性，将底物转化为药物的技术 主要包括： 酶的选择与催化条件确定 固定化酶 酶的非水相催化 第一节 概述 酶的类型： 蛋白类酶（P酶） 核酸类酶（R酶） 一. 酶的催化特性： （一）酶催化的专一性： 1.绝对专一性：一种酶只能催化一种特定结构的底物进行一种特定的反应 2.相对专一性：一种酶可催化一类结构相似的底物进行某种相同类型的反应 （1）键专一性：底物需含有相同化学键 （2）基团专一性： 底物需含有某些相 同的基团 二. 影响酶催化反应的主要因素： （五）抑制剂的影响 （六）激活剂的影响 三. 酶活力测定 （一）酶活力的测定方法： （二）酶活力单位： （三）酶的转换数与催化周期： 四. 酶的分类与命名： 酶的基本类型分为蛋白类（P酶）及核酸类（R酶），P酶只能催化其它分子反应，而R酶除催化其它分子反应外，还可催化酶分子自身的反应 二者命名的总原则相同 （一）P酶的分类及命名： （二）R酶的分类： * * （二）酶催化的高效性： 酶催化转换数为103/min或更高，为非酶催化的107～1013倍 原因：酶催化反应的活化能显著降低 （三）酶催化反应的条件温和： 酶催化反应通常在常温、常压、pH近中性的条件下进行，与非酶催化反应的极端条件有显著区别，有利于降低生产成本，节约能源 （一）底物浓度的影响： 底物浓度与酶催化反应速度的关系 [s] Vm V 中间产物学说——底物首先与酶结合形成中间产物，待转化为产物后重新释放游离的酶 米氏方程： V= Vm S Km + S V —— 反应速度 S —— 底物浓度 Vm —— 最大反应速度 Km —— 米氏常数 （二）酶浓度的影响： 根据中间产物学说，酶量越大，酶与底物结合量越大，反应速度越大，即 V=k [ E ]（k为常数） 反应速度 酶浓度 （三）温度的影响： 反应速度 温度 在一般的反应中，温度的升高使反应速度加快，这与反应所需的活化能的获得有关，但酶分子结构会因温度的变化而改变，因此，酶催化反应有最适温度 酶的最适温度并非物理常量，会受外界条件的影响而改变，如反应时间等 多数酶在60℃以上会变性失活，但部分酶具有热稳定性，如Taq酶、耐高温ɑ - 淀粉酶等 （四）pH的影响： 反应速度 pH 与温度对酶催化反应的影响类似，在有效pH范围内，酶催化反应有其最适pH pH对酶活性的影响表现在以下方面： 影响酶蛋白构象，使酶变性失活 影响酶活性部位——催化基团的解离状态，使其不能与底物结合或使底物不能分解为产物 影响底物分子，使其不能与酶结合或结合后无法生成产物 某些物质通过与酶催化作用的必需基团结合，影响酶的结构和性质，从而使酶的催化活性降低或丧失。 多数抑制剂是外源物质，如Ag+、Hg 2+、Pb 2+等重金属离子。 也有部分抑制剂是细胞正常代谢产物，对代谢中的酶促反应起调节作用。 抑制剂分可逆与不可逆两种，后者与酶结合后，无法除去而导致酶活性不可恢复。 又称活化剂，指可以提高酶活性或者使酶的催化活性显示出来的物质。 常见的激活剂有Ca 2+、Mg 2+、Co 2+、Zn 2+、Mn 2+等金属离子与Cl - 等。 激活剂通常与底物及酶形成三元复合物，进行催化反应生成产物。 部分蛋白酶类通过其催化作用，使其它酶或酶原的结构发生改变，以提高这些酶的催化能力或使酶原获得催化活性。 目的：为确定酶量的多少及其变化情况 指标：酶催化反应初速度 单位：单位时间（t）内底物（S）的减少量或产物（P）的 增加量 步骤： （1）配制底物溶液 —— 一般要求新鲜配制，且需达到酶催化反应所需要的纯度 （2）确定反应条件 —— 可选用室温、体温或最适温度，最适pH，底物浓度大于5Km。反应过程中保持恒温及对pH进行缓冲，并按需要适量添加激活剂。 （3）进行反应，记录时间。 （4）测定并计算酶活力 —— 到达预订时间后，可利用高温、低温、变性剂或加入酸碱溶液等方法立即终止反应，并采用化学检测、光学检测及气体检测等技术测定底物的减少量或产物的生成量。 国际单位（IU）：特定