(精选)ABI3100简介及其常见问题解析教学课件.ppt

4.检测样品 目前检测样品是marker0.2μl ，上样量1.0μl，总体积10μl 样品的准备：甲酰胺与marker 混合均匀分装，加入样品后振荡， 离心，95℃变性5min，冰浴3min， 离心，上样。 5.结果的存储 先在“我的电脑”的E盘上建一个文件夹用于储存结果，在数据收集软件中有 可以进行设定。 结果的重新导出： 结果可以重新导出，或将所需要的部分结果重新导出到指定文件夹。 6.手动控制 注意：手动控制oven时要“send”两次，一次设定温度一次打开oven。 四.数据分析软件的简介 应用GeneMapper进行数据的分析，下面进行简单的介绍。 1.Panel及bin的导入 2.分析数据 添加要分析的文件夹： panel Size standard Analysis method 分析后如果如下图所示：不通过，查找原因。 查看原始数据： 查看内标： 结果所得图形： 分析工具栏： → 常见问题的解析 1.所有毛细管没有数据 原因：毛细管或block通路中有气泡 没有样品进入 自动进样器不在正确位置，使毛细管头吸入气泡或接触不到样品 措施：重新正确上样，排气泡，拆毛细管清洗block，syring，更换胶 * ABI3100简介 及 其常见问题解析 姜艳艳 2007.3.9 主要内容 ABI遗传分析仪简介 ABI3100相关简介 ABI 3100构造及毛细管工作原理 数据收集软件的简介 数据分析软件的简介 常见问题解析 一. ABI遗传分析仪系列 ABI测序仪和遗传分析仪系列： 377 DNA 测序仪 所采用的是板胶 最多可同时检测96个样品，要人工手动上样。 采用Genescan和Genotyper进行分析。 310遗传分析仪 采用一道的毛细管进行电泳。 一支注射器注胶 不能使用96孔板,使用48或96孔的模块，0.5ml的离心管上样。 所使用的软件及设置与377比较相像。 3100和 3100Avant基因分析仪 3100为16道毛细管 3100Avant为4道毛细管 使用96孔板或384孔板进行电泳 使用注射器将胶注入毛细管，且有两支注射器 3130 和 3130xl 基因分析仪 3130为四道， 3130xl为16道。 从胶瓶中自动吸胶注入毛细管。 软件方面与3100基本相同。 3730 和 3730xl 基因分析仪 3730为48道毛细管3730XL为96道毛细管的 其他与3130基本相同 型号 毛细管状态 胶的状态 备注 377 无 聚丙稀酰胺凝胶 使用板胶，人工上样　 310 1根 POP-6和 POP-4 注射器自动灌胶 3100Avant 4根 POP-6和 POP-4 　 3100 16根 POP-6和 POP-4 　 3130 4根 POP-6和 POP-4 自动排气泡，灌胶 3130xl 16根 POP-6和 POP-4 　 3730 48根 POP-6和 POP-4 　 3730xl 96根 POP-6和 POP-4 　 　 　 主要性能参数： 此图表示的是：气泡没有排出通道。 注意96孔板的使用。3100是16道的，每个run 使用两排孔。若是4道的则是每个run 4孔，注意与样品名的对应。 310 是单道的毛细管，不能使用96孔板，而是使用0.5ml 的离心管上样。 阳极有电极插在buffer中 阴极没有电极，而是在毛细管外包裹着一层金属，插在buffer中。 与3100不同，310在毛细管旁边有一根金属电极插在buffer中。 2.毛细管工作原理 毛细管两端： 电渗流：pH大于6时，石英带负电荷，熔融的石英毛细管内层带负电，来自毛细管内的溶液的正电荷产生电渗流，沿负电荷的毛细管壁形成双层，在电场作用下，双层中的阳离子向阴极移动，带动可溶分子向同一方向移动。 为保证DNA片段分离的重复性，必须包埋毛细管内壁以除去电渗流，ABI3100采用能进行DNA分离的POP-4或POP-6胶线性包埋毛细管内壁，阻止电渗流，使DNA从阴极到阳极没有液体的流动。毛细管的包埋使之随着时间而性能有所降低，影响使用寿命。 电泳： 检测： 一束激光被分成两束从毛细管的两侧同时照亮16根毛细管，当DNA片段经过检测室时，所带荧光染料被激发，荧光被检测到，形成胶图。 三.数据收集软件的简介 1.开关机器 顺序：电脑，3100机器，收集软件（关机相反） 2.