分子手术与纳米治疗讲座之三PPT.ppt

生物芯片;在20世纪末，出现了一种崭新的生物技术——生物芯片，它是微电子芯片技术、物 理检测技术与生物技术的交叉综合，它将数字信息平行处理“芯片技术”的概念延伸至 生命信息领域。从此生物研究从单参量走向多参量并行研究的新天地，它对基因组学、蛋白组学的研究，及对疾病、疫情的早期诊断和监测产生了巨大影响。;;DNA芯片;什么是DNA芯片;DNA芯片的应用;DNA芯片技术的展望;实用例子 监测自来水受污染程度的基因芯片 日本久保田公司最近开发出利用基因芯片检测自来水是否受到致病微生物污染的技术。 这种基因芯片检测法主要针对会引起人腹泻甚至死亡的隐胞子虫。这种微生物表面有坚硬的蛋白质外壳，常用的氯气消毒法很难杀灭它们，是自来水水质管理方面的一个难题。 久保田公司的技术是将能与隐胞子虫的基因相结合的基因片断固定在芯片表面，如果被检测的样本中含有隐胞子虫，它们的基因和芯片上的基因片断结合在一起，芯片就会发出荧光。基因芯片检测法能从基因水平上检出有害微生物，准确而简便。;蛋白质芯片;本章节涉及到早期的免疫芯片和后来的蛋白质芯片。 所谓蛋白质芯片(proteinchip)，就是用于蛋白质检测、鉴定、功能研究及相互作用分析的生物芯片，它最突出的特点是微型化、集成化和高通量，可以使人类用很少的样品在微型操作平台上同时研究成千上万种蛋白质，获取海量的生物信息。这些需要研究的蛋白质称为靶蛋白(targetprotein)。因为首先需要将靶蛋白“抓住”，然后才能对其进行研究，所以蛋白质芯片表面分布有可以“抓住”靶蛋白的物质，称为捕获探针(capture probe)(通常也是蛋白质)。各种不同的捕获探针通过严格的生物信号识别、捕获不同的靶蛋白，并与其配对，形成蛋白质复合物。;就目前的蛋白质芯片而言，捕获探针大都以微点阵(microarray)的形式被固定在芯片表面，称为微点阵蛋白质芯片。图7．3即为一种含有10 800个微点阵的蛋白质芯片，每个微点(microspot)含有lOs～10，”个捕获探针分子。从小区域放大图中可以看出，相同的捕获探针在捕获相同的靶蛋白后给出相同性质的检测信号(蓝色)，而一种与其不同的捕获探针在捕获不同的靶蛋白后则可给出完全不同的检测信号‘(红色)。这表明，如果该芯片上每个微点阵含有一种不同的捕获探针，那么它可以同时分析10 800种蛋白质!;“微点阵”的概念最早产生于免疫学检测领域。为了实现多种免疫学指标的同时检 测，著名免疫分析学家Ekins等人利用单克隆抗体(作为捕获探针)建立了一种超灵敏的免疫分析方法，继而通过数学理论分析，指出该方法完全可以发展成为超灵敏的微点阵多元免疫检测系统(也称“免疫微点阵”)，可以同步分析成千上万种生物物质。当时还没有“chip”这个概念，而称其为“compactdisk’(CD，光盘)。但当时认为，同时分析这么多种类的物质是不必要的，因为免疫学检测的指标总共只有数百种!而随着生命科学的迅猛发展，生物物质的数量剧增，现在该模式已广泛应用于基因芯片和蛋白质芯片。;在蛋白质芯片中，捕获探针是至关重要的。选择怎样的探针将直接关系到芯片的灵 敏度和特异性等诸多性能指标。目前最有前途的探针分子是抗体，因为它的分子设汁具有很好的特异性。通过抗体工程可以得到各种抗体，组成数量极为可观的抗体文库，应用这些抗体制造的蛋白质芯片，就能捕获含有各种功能基团的蛋白质并对其进行全面快速的分析研究。;那么我们怎样才能知道捕获探针是否已经捕获到了靶蛋白呢?如果捕获到了，到底 是多少数量呢?这就需要一个检测系统，它是蛋白质芯片不可或缺的组成部分。已经建 立的检测系统有两类，一类需要引入标记物，称为检测探针(detectionprobe)，也叫信 号报告分子，它可以检测到芯片上捕获探针与靶蛋白结合的复合物，并发出相应的信号。检测探针携带的信号通常是荧光，可以用电荷耦连设备(CCD)照相机或激光共聚焦扫描仪获取信号数据；信号也可以是放射性或化学发光等，检测均可通过相应设备来完成。图7．4示意了需要检测探针参与的蛋白质芯片分析系统。另一类则无需引入标记物，而是通过特殊技术直接对蛋白质进行分析测定。无标记检测技术因其明显的优越性近年发展迅速，较为突出的有表面等离子体共振(surfaceplasmonresonance，SPR)技术和表面增强激光解析电离(surfaceenhancedlaserdesorption／ionization，SELDl)技术。前者通过测定共振角的变化来分析蛋白质之间的相互作用，多用于生物传感器芯片；后者是用激光解吸电离的方法将保留在芯片上的蛋白质解离出来，然后通过飞行时间质谱进行精确测定和后续分析，已广泛应用于蛋白质组学研究。图7．5简要示意了SELDI的检测原理。 ;;;蛋