植物组培抗菌剂 PPM(Plant Preservative Mixture).pdf

PPM™ - 植物组培抗菌剂 Plant Cell Technology, Inc. 植物组培抗菌剂PPM (Plant Preservative Mixture)是为商业及研究用植物组织培养实 验室和植物种植者开发、生产的旗舰产品。 作用机理 它是一种广谱抗微生物剂，可以杀死细菌和真菌细胞，防止真菌孢子的萌发，并在较高 浓度下能消除内源性污染的外植体。研究表明PPM 活性成分可以渗透过真菌或细菌细胞壁， 抑制柠檬酸循环和电子传递链等中心代谢循环中的关键酶的活性，并且可以抑制培养基中的 单糖和氨基酸向真菌和细菌细胞的运输。PPM 能有效地抑制植物细胞和植物组织培养中的 通过空气、水、人传播的微生物污染及内源性污染，而不会影响体外种子发芽、愈伤组织增 殖和愈伤组织的再生。 优点 （与抗生素相比）： ★是一广谱、高效抗细菌/抗真菌剂。 ★比常用抗生素价格更低廉，可以作为植物组织培养基的标准成分，并可作为常规使用。 ★它的靶标是抑制多种酶，所以产生抗耐药性的突变体是不可能的。 ★具有热稳定性，可以和培养基一起灭菌。 操作流程 （注意：以下所述的操作流程是通用的，根据您的具体物种可能需要稍微改动。） PPM 简化地组织培养工作流程如下： 1、含有 PPM 的培养基可以在超净台外面分装，即无需无菌操作，等琼脂凝固后把盖子盖 好。如果是自动分装培养基装置，我们建议在分装前后先用高压灭菌热水处理分装管。 2、如果储存在灭菌的容器中或在此之前储备液没有污染，含有 PPM 的热敏感或热稳定的 液体培养基无需经微孔滤膜或高压灭菌。含有200mg/L 或更多氨基酸或蛋白质丰富培养 基，建议加入PPM 后一起滤灭。 北京市海淀区西三旗悦秀路99 号通厦公元99 一号楼305 室。电话:400-810-0506 3、超净工作台里的器具（镊子或解剖刀）无需在火焰上烧，只要定期地在70%酒精里蘸一 下即可。超净工作台无需验证，可以在超净工作台外面的干净台面上操作，不超过一小 时即可。 4 、PPM 是酸性的溶液（pH 3.8）。应4 度保存。低接种密度下推荐剂量0.05-0.2%（v/v ）（0.5-2.0 ml PPM/L 培养基）在灭菌前或灭菌后加入培养基防止通过空气传播污染或内源性污染。 处理内源性污染或获得无农杆菌的植物材料需要高剂量的PPM。 5、对于高密度的细菌或种子表皮的真菌孢子，PPM 的灭菌效率不是太高。对于体外萌发， 种子应该按照传统的方法先用漂白剂进行表面消毒。因此，在含有 PPM 的萌发培养基 里，在一个非灭菌的容器中种子可以在自来水下冲洗然后在超净台中吹干。如果所使用 的器具末端接触到活性细菌、真菌组织或其它怀疑被污染的东西，这些器具应该通过高 压或电子加热设备进行灭菌。 6、一般剂量水平。对于内源性污染，推荐剂量是0.05-0.2% 。对于愈伤增殖、器官形成和胚 胎形成，推荐的剂量范围是 0.05-0.075% 。在培养基灭菌前或灭菌后加入 PPM，低密度 情况下可防止通过空气传播的污染和内源性污染或延缓细菌的生长。要消除高密度污染， 需要增加PPM 的剂量（参考下面第七段）。 7、内源性污染： （a ） 对于种子：添加 2~3% PPM 在一般习惯使用的培养基里，但千万不要添加Tween 20 和 pH 调整剂，轻轻地搅拌 8~12 小时，之后直接拿出放入含有 PPM 的培 养基里，若是草本植物换至 0.05~0.1% PPM 的萌发培养基即可；而木本植物则 换至 0.2% PPM 的萌发培养基。对于种皮较硬的种子（比如芦笋、羽扇豆属植 物、观赏棕榈、玫瑰等）应该在用PPM 灭菌前先在水中浸泡2-4 个小时。 （b） 对于外植体：以 1cm 外植体为例，添加4~5% PPM 到全MS 基盐中 ，但千 万不要添加 Tween 20 和 pH 调整剂，搅拌4~12 小时之后直接拿出，插入含 有PPM 的培养基里，若是草