第十章细胞核及其骨架.ppt

1.通过核孔复合体的被动扩散 核孔复合体作为被动扩散的亲水通道。 实验证明？ 将聚乙烯吡咯烷酮包被的胶体金颗粒，注射细胞质内，发现小分子物质能够以自由扩散的方式通过核孔进入细胞核。 扩散数率与分子大小成反比。 待本身信号序列的蛋白质，通过主动运输 与其他信号序列的成分结合，主动运输 例子： 带有放射性标记的完整核质蛋白、头、未片段（N、C端）分别注射非洲爪蟾卵母细胞中： 胶体金包被完整核质蛋白、尾部分别注射非洲爪蟾卵母细胞中： 结果：完整的核质蛋白、未片段能够在细胞核内迅速地积累，而头部却被拒之核外。 结论：信号序列在尾部 1982年R. Laskey发现核内含量丰富的核质蛋白(nucleoplasmin)的C端有一个信号序列，可引导蛋白质进入细胞核，称作核定位信号（nuclear localization signal，NLS）。 第一个被确定的NLS是病毒SV40的T抗原，它在胞质中合成后很快积累在核中。 其NLS为：pro-pro-lys-lys-lys-Arg-Lys-val，即使单个氨基酸被替换，亦失去作用。 NLS由4-8个氨基酸组成，含有Pro、Lys和Arg。 对其连接的蛋白质无特殊要求，并且完成核输入后不被切除。 Karyopherin是一类与核孔选择性运输有关的蛋白家族，相当于受体蛋白。 其中imporin负责将蛋白从细胞质运进细胞核， exportin负责相反方向的运输。 通过核孔复合体的转运还涉及Ran蛋白， Ran是一种G蛋白，调节货物受体复合体的组装和解体， 在细胞核内Ran-GTP的含量远高于细胞质。 （一）核质蛋白向细胞核的输入（通过核孔复合体的主动运输） 蛋白与NLS受体，即impotin α/β二聚体结合； 货物与受体的复合物与NPC胞质环上的纤维结合； 纤维向核弯曲，转运器构象发生改变，形成亲水通道，货物通过； 货物受体复合体与Ran-GTP结合，复合体解散，释放出货物； 与Ran-GTP结合的impotin β，输出细胞核，在细胞质中Ran结合的GTP水解，Ran-GDP返回细胞核重新转换为Ran-GTP； impotin α在核内exportin的帮助下运回细胞质。 (二）对细胞核向细胞质的大分子输出 大多数情况下，细胞核内的RNA是与蛋白质形成RNP复合物转运出细胞核的。 RNP的蛋白质上具有核输出信号（nuclear export signal, NES），可与细胞内的受体exportin结合，形成RNP-exportin-Ran-GTP复合体， 输出细胞核后，Ran-GTP水解，释放出结合的RNA，Ran-GDP、exportin和RNP蛋白返回细胞核。 11.2.4 核运输系统(nuclear-transport system) 核质蛋白(nucleoplasmin) 的输入作用 核质蛋白(nucleoplasmin) ：核质蛋白在细胞质中合成后就通过核定位信号运送到细胞核, 是一种丰富的核蛋白, 在核小体的装配中起作用。 核质蛋白的作用：既能促进组蛋白与DNA的相互作用形成核小体, 又能避免DNA与组蛋白间因强静电吸引而形成非特异结合的不溶性聚合物, 但它本身并不参与核小体的组成。 核质蛋白结构： 具有头尾两个不同的结构域, 由5个 单体组成, 尾部具有核定位信号。 核输出 主要物质：各种RNA和核糖体亚基。 (a) 加工成熟的mRNA-hnRNP的5＇端形成帽结合复合物(CBC), 该端首先通过NPC; (b)在通过核孔时, 核限制hnRNP蛋白与mRNP脱离; (c) 细胞质中RanGAP促使RanGTP水解, 穿梭的hnRNP回到细胞核, 释放出的mRNA同胞质溶胶中的mRNP蛋白, 包括poly(A)结合蛋白[poly(A)-binding perotein,PABP]结合。 第二节 细胞核骨架 1）核基质(Nuclear Matrix) 2) 染色体骨架 3) 核纤层(Nuclear Lamina) （三）研究核骨架的分级抽提方法 非离子去垢剂溶解膜结构系统-胞质中可溶性成分随之流失; 再用Tween40和脱氧胆酸钠处理-胞质中的微管、微丝与一些蛋白结构被溶去,胞质中只有中间纤维网能完好存留; 用核酸酶与0.25mol/L硫酸铵处理,染色质中DNA、RNA和组蛋白被抽提, 呈现一个精细发达的核骨架网络, 结合非树脂包埋-去包埋剂电镜制样方法,可清晰地显示核骨架-核纤层-中间纤维结构体系。 核基质的功能 1）染色体骨架(scaffold) 2）核纤层 核纤层：位于内核膜的内表面的纤维网络，可支持核膜，并与染色质及核骨架相连。 2）核纤层蛋白的骨架作用 核膜下的骨架, 维持细胞核的形态和核重建具有重要作用 染色质提供锚定位点 3