基因工程(自作).ppt

几种限制性内切酶 限制性内切酶的作用过程 质 粒 DNA连接酶的作用过程 基因工程过程示意图 * 类型 杂交育种 人工诱变育种 单倍体育种 多倍体育种 原理 常用方法 优点 缺点 实例 将具有不同 优良性状的 两亲本杂交 用物理或化学 的方法处理生物 花药离体培养 用秋水仙素 处理萌发的 种子或幼苗 使位于不同个 体的优良性状 集中于一个个 体上 提高变异频率加速育种进程 明显缩短 育种年限 器官大型， 营养含量高 育种时间长 有利变异少 需大量处理 供试材料 技术复杂，需与杂交育种配合 只适用于植物 基因突变 染色体组成倍减少 染色体组成倍增加 基因重组 培育矮抗小麦 培育青霉 素高产菌株 三倍体无子 西瓜的培育 培育矮抗小麦 几种主要育种方法的比较 基因工程 基因a的产物 生物a DNAa 提取 基因a 剪切 拼接 DNAb（运载体） 重组DNA 导入 受体细胞 表达 按人类意愿定向 改变生物性状 例如：从苏云金芽孢杆菌体内提取抗虫基因，使其在棉花体内表达，得到抗虫棉。 人类需要的基因产物 结果 剪切→拼接→导入→表达 基本过程 DNA分子水平 操作水平 基 因 操作对象 生物体外 操作环境 基因拼接技术或DNA重组技术 基因工程别名 基因工程概念 基因工程操作的工具 1、基因的剪刀 限制性内切酶 分布：主要在微生物中。 特异性。即识别特定核苷酸序列，切割特定切点。 结果：产生黏性未端。 特点： 一种限制性内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列（回文序列），并在特定的切割点上将DNA 分子切断。目前已发现的限制酶有200多种。 [注意] EcoR1内切酶 切断的位置 HindⅢ内切酶切断的部位 2、基因的运输工具——运载体 作用：将外源基因送入受体细胞 种类：质粒、噬菌体和动植物病毒 条件： 能在宿主细胞内复制并稳定地保存 具有多个限制酶切点 具有某些标记基因 A A T T C G G A A T T C 抗虫基因 G A A T T C A A T T C G 质粒 A G A T T C A A T T C G 重组质粒 抗虫基因 同一目的基因两侧的回文序列不一定相同；不同目的基因两侧的回文序列也不一定相同，因此作为运载体来说， 应具有多种限制酶切点，以便在不同情况下运载不同目的基因。 [注意] 3、基因的针线——DNA连接酶 将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 磷酸二酯键，不是氢键。 连接酶的作用 连接的部位 基因操作的基本步骤 四步曲 目的基因的检测和表达 提取目的基因 目的基因与运载体结合 将目的基因导入受体细胞 （一）提取目的基因 1、从DNA中直接分离基因（鸟枪法） 供体DNA分子 分离目的基因 找出含有目的 基因的细胞 扩增DNA片段 不同受体细胞 （细菌） 运载体 许多片段 内切酶 例如：提取VB1基因将重组DNA分子VB1导入营养缺陷型细菌体内，然后放入没有的培养液中培养，一段时间后能存活者则含有VB1基因。 缺点：盲目性大，工作量大，成功率低。 优点：操作简便 2、人工合成目的基因 逆转录法：以信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA(基因)。 直接合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。 （二）目的基因与运载体结合 用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在DNA连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。 （三）将目的基因导入受体细胞 基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌和动植物细胞等。根据运载体的不同，将目的基因导入受体细胞时可能利用病毒侵染细胞的途径，或者是利用显微注射等技术。 *