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人感染H7N9禽流感病毒 实验室检测要求 菏泽市疾病预防控制中心检验科 刘启林 2013年4月9日1.H7N9实验室诊断方法。 2.实验室检测策略。 3.标本的采集、包装、保存和运送。 H7N9实验室诊断方法 1.病毒培养分离: 金标准,只要拿到毒株,就能确诊传染病的种类。费时 5-7天. 2.血清学检测:酶病联免疫法(ELISA)费时 急性期、恢复期血清抗体 2-4周 3.核酸检测: 快速敏感特异,可以早期发现病人. Real-Time PCR 实时检测,灵敏度更高 全封闭体系,不需电泳:不易交叉污染,结果更快4-5h。 目前国家推荐使用Real-TimePCR检测方法;市疾控中心流感网络实验室已具备检测能力。 实验室检测策略 1.不明原因肺炎病例标本检测: 流感网络实验室收到不明原因肺炎标本后,要在12小时内进行标本处理和核酸检测,进行甲型通用引物,甲型H1N1流感,季节性H3N2流感,A(H5)、A (H7)亚型流感病毒以及SARS、新型冠状病毒的检测。如果H5或H7亚型、SARS、新型冠状病毒检测阳性,应将标本立即送省疾控中心进行复核鉴定,省疾控复核阳性的标本,在24小时内送国家流感中心进行复核鉴定和病毒分离。 实验室检测策略 2.暴发疫情标本检测: 流感网络实验室收到暴发疫情标本后要在24小时内进行标本处理和核酸检测,进行甲型通用引物,甲型H1N1流感,季节性H3N2流感,A(H5)、A (H7)亚型流感病毒的检测。如果H5或H7亚型检测阳性,立即将标本送省疾控中心进行复核鉴定。 实验室检测策略 3.流感样病例标本检测: 流感网络实验室收到常规监测标本后,应进行甲型通用引物,乙型通用引物、甲型H1N1流感,季节性H3N2流感病毒检测。如果甲型通用引物为阳性,甲型H1N1流感,季节性H3N2流感病毒检测为阴性,应再进行A(H5)和A(H7)亚型检测。如果H5或H7亚型检测阳性,立即将标本送省疾控中心进行复核鉴定。 标本采集 标本种类及采集时间 1.上呼吸道标本:咽拭子,鼻咽拭子、鼻咽抽提物最佳采集时间用药前发病3天内,一般不超过7天 2.下呼吸道标本:主要采集重症患者,无时间限制包括气管吸取物,支气管洗液,肺组织活检标本 3.尸检标本:病人死亡后应尽早进行解剖,无菌条件下主要采集肺组织和气管组织标本。 4.血清标本:急性期血样应尽早采集,发病后7天内,恢复期血清在发病后2-4周采集。空腹采集3-5ml全血 采样材料 无菌拭子 采样管 专用记号笔 采样登记表 签字笔 采样液 可封口塑料袋 标本送检箱 个人防护设备(PPE) 标本采集要求 1.做好个人防护: 采集标本时应穿戴N95口罩、隔离衣、手套 帽子必要时使用防护镜或面罩。 2.信息完整: 疑似人感染H7N9禽流感病例标本送检单姓名\性别\年龄\职业\现住址\发病日期\标本种类\标本量\采集日期\备注。 标本采集要求 3. 选择不易破损的采样管 4.采样液: Hanks氏液或MEM/DMEM液。禁用生理 盐水,PBS。 5.避免污染:减少细菌污染,避免接触含菌较高的部位;避免与病人检材交叉污染。 标本采集方法 1.咽拭子标本 采样时,让受检者 尽量张开口,用压舌板 将舌头轻轻压下, 用灭菌拭子擦拭 双侧扁桃体及咽后壁, 将棉签头部浸入采集液中, 尾部弃去,拧紧盖子。 2.鼻咽拭子标本 将无菌拭子轻轻插入 鼻道内鼻腭处,停留片刻后 缓慢转动退出,将棉签头部 浸入采集液中,尾部弃去, 和采集的咽拭子放入同一 采样管中,拧紧盖子。 3.鼻咽抽取物 用与负压泵相连的收集器 从鼻咽部抽取粘液。 先将收集器头部插入鼻腔, 接通负压,旋转收集器头部 并缓慢退出。收集抽取的粘液, 并用采样液3ml冲洗收集器3次。
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