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质粒的提取与酶切电泳鉴定质粒提取关键基因组与质粒的有效分离碱裂解法高使质粒和染色体变性同时沉淀蛋白质再将值调至中性质粒较小很容易复性成双链而染色体较大不会复性缠结成网状不溶物质从而可以通过离心除去注意事项实验方法碱裂解法挑取携带目标单菌落于含振荡培养过夜取培养液倒入管中分次加入离心离心弃去上清用涡旋混匀器使菌体沉淀重悬浮于冰预冷的溶液加入新配制的溶液盖紧管口快速温和颠倒离心管次菌液变得透亮以混匀内容物千万不要振荡加入预冷的溶液盖紧管口反复颠倒离心管次出现白色沉淀使沉淀混匀离心分钟上清液移入干净离
质粒DNA的提取与酶切电泳鉴定 质粒提取关键： 基因组DNA与质粒DNA的有效分离 （碱裂解法） 高pH使质粒DNA和染色体DNA变性，同时沉淀蛋白质。再将pH值调至中性，质粒DNA较小，很容易复性成双链。而染色体DNA较大，不会复性，缠结成网状不溶物质，从而可以通过离心除去。 注意事项: 实验方法 * * 碱裂解法 1、挑取携带目标DH5α单菌落于3-5 ml LB（含Amp 100μg/ml）,37℃ 振荡培养过夜（12-16 h）； 2、取2 ml培养液倒入1.5ml EP管中（分次加入，离心）， 4℃ 12000 rpm 离心30s -1min，弃去上清； 3、用涡旋混匀器使菌体沉淀重悬浮于250μl冰预冷的溶液Ⅰ。 4、加入新配制的溶液Ⅱ250μl，盖紧管口，快速温和颠倒离心管5次，菌液变得透亮，以混匀内容物（千万不要振荡）。 5、加入350μl预冷的溶液Ⅲ，盖紧管口，反复颠倒离心管5次，出现白色沉淀，使沉淀混匀， 4℃ 12000rpm 离心10分钟。 6、上清液移入干净离心管中，加入等体积的酚/氯仿（1:1），振荡混匀，4℃下12000 rpm离心2分钟。 7、将上层水相移入干净离心管中，加入2倍体积的无水乙醇，振荡混匀后室温放置2分钟，然后4℃下12000 rpm离心5分钟。 8、彻底弃上清，将管口敞开倒置于卫生纸上使所有液体流出，加入1ml70％乙醇洗沉淀一次，4℃下12000 rpm离心2分钟。 9、吸除上清液，将管倒置于卫生纸上使液体流尽，室温开盖放置10-15min，使乙醇挥发殆尽。 10、将沉淀溶于30-50μl TE缓冲液（pH8.0，含20μg/mlRNaseA）中，储于-20℃冰箱中。 11、 酶切鉴定并将没有酶切的质粒与酶切的质粒进行琼脂糖凝胶电泳。（酶切体系一般1-2ul提取的质粒，10×buffer，相应的酶，余下加水，一般鉴定所用的酶切体系建议10ul） *
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