免疫学检测技术 2.pptVIP

免疫学检测技术;抗原或抗体检测原理： 借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象，对标本中的抗原或抗体进行定性或定量的检测。 ;抗原或抗体检测原理;一种细菌可以刺激多少种抗体产生？;抗体（Antibody);; 一、凝聚反应(Agglutination) 二、沉淀反应 1、溶液中的沉淀反应 2、凝胶扩散沉淀 3、免疫电泳 血清免疫电泳 火箭电泳 对流免疫电泳 三、补体参与的反应 四、免疫标记的抗原抗体技术 酶联免疫吸附（ELISA）;一、凝集反应;一、凝集反应;二、沉淀反应;3、双向扩散：又称琼脂扩散，是利用琼脂凝胶作介质的一种沉淀反应。 琼脂是多孔的网状结构，可使大分子物质通过，分子的扩散作用使分别两处的抗原抗体相遇，比例合适时形成沉淀。可观测到沉淀弧。 沉淀弧的特征与位置取决于抗原分子的大小、结构、扩散系数和浓度等。当抗原、抗体存在多种体系时，会出现多条沉淀弧。; 双向扩散法的操作：生理盐水配制1%-5%的琼脂，取4mL倒在普通载玻片上，凝固后打孔，中心孔滴入抗原，外周孔滴入抗体用于测定抗体效价，中心孔滴入抗体，外周孔滴入抗原，用于检测抗原的存在和定性抗原。;二、沉淀反应; 4、单向免疫扩散：又称单向琼脂扩散，是定量抗原的一种检测方法。与双向扩散不同的是在琼脂中含有一定量的抗体，孔内加入未知量的相应抗原。在37度保温过程中，孔内的抗原向周围扩散，与抗体形成沉淀圈。根据沉淀圈的大小确定抗原的含量;二、沉淀反应;免疫电泳;抗原或抗体检测的现代方法：;免疫荧光技术;1、基本原理： 将试剂抗原或试剂抗体用荧光素进行标记，试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后，测定复合物中的荧光素，这种免疫技术，称为免疫荧光素技术。 ;1、基本原理： 免疫荧光素技术 ; 2、标本的制作 食品卫生检验中，荧光标记抗体检测标本的制作方法是将样品增菌液涂在载玻片上，涂片应薄而均匀，干燥后用化学方法固定，然后进行荧光染色。 ; ? 染色当天即作镜检 ? 通风良好的暗室内进??? ? 选择好光源或滤光片 ; ;ELISA 基本原理 ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 ;ELISA 基本原理 在测定时，把受检酶标抗体或抗原和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。;ELISA 基本原理 ; ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体， ②酶标记的抗原或抗体， ③酶作用的底物。 　; ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。可设计出各种不同类型的检测方法。 （一）双抗体夹心法 　双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下： 　　（1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。 　　（2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。 　　（3）加酶标抗体： 　（4）加底物：;双抗体夹心法测定抗原;ELISA测定方法 1、 加样 2、 保温 3、 洗涤 4、 比色 5、 结果判定 ;封闭 P330 封闭(blocking)是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。抗原或抗体包被时所用的浓度较低，吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙，封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥在ELISA其后的步骤中干扰物质的再吸附。封闭的操作与包被相类似。 最常用的封闭剂是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明胶作为封闭剂的。脱脂奶粉也是一种良好的封闭剂，可以高浓度使用（5%）。 ;采用酶标法（ELISA）进行三聚氰胺检测 ; 酶标仪原理与结构 ;ELISA法检