朱玉贤-分子生物学-第9章-原核基因表达调控.pptVIP

第一节 基因表达调控概述 基因表达的时间性和空间性 时间特异性 Each of the α-like andβ-like globin gene families is organized into a single cluster that includes functional genes and pseudogenes. 第二节 原核基因调控机制 1940年， Monod发现细菌的“二次生长曲线”。 1951年，Monod与Jacob合作，发现两对基因： Z基因：与合成β-半乳糖苷酶有关； I基因：决定细胞对诱导物的反应。 Szilard：I基因决定阻遏物的合成，当阻遏物存在时，酶无法合成，只有有诱导物存在，才能去掉该阻遏物。 Jacob：结构基因旁有开关基因（操纵基因），阻遏物通过与开关基因的结合，控制结构基因的表达。 2、乳糖操纵元结构 调节蛋白 →结构基因不转录 诱导物 →结构基因转录 可诱导调节：指一些基因在特殊的代谢物或化合物的作用下，由原来关闭的状态转变为工作状态，即在某些物质的诱导下使基因活化。 例：大肠杆菌的乳糖操纵子 分解代谢蛋白的基因 例：色氨酸操纵子、合成代谢蛋白的基因 负转录调控系统又可分为： 负控诱导：阻遏蛋白+诱导物→结构基因转录； 负控阻遏：阻遏蛋白+辅阻遏物→结构基因不转录。 正控系统又可分为： 正控诱导：诱导物的存在使激活蛋白处于活性状态； 正控阻遏：辅阻遏物的存在使激活蛋白处于非活性状态。 第三节 乳糖操纵子(lac operon) 内容提要： 乳糖操纵子的结构 酶的诱导——lac体系受调控的证据 乳糖操纵子调控模型 影响因子 Lac操纵子中的其他问题 一、 乳糖操纵子的结构 二、 酶的诱导现象 分解底物的酶只有在底物存在时才出现！ 无乳糖时，几个β-gal/cell 加入乳糖时，5000个酶分子 再去掉乳糖，lac mRNA下降 乳糖能激发lac mRNA的合成 乳糖的诱导作用是由酶前体转化而来，还是诱导新酶合成？ 培养基（35S-aa, 无乳糖）→ E.coli繁殖→培养基（无35S -aa, 加入乳糖） → β-gal(无35S) 三、 调控机理 体外结合竞争实验: 阻遏物＋RNA pol, off RNA pol＋阻遏物， on 1. 阻遏状态 2 诱导状态 3 诱导物不是乳糖！ 4、gratuitous inducer  安慰诱导物 义务诱导物 可诱导半乳糖苷酶产生，但不是其底物 IPTG，异丙基硫半乳糖苷 X-gal, 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖（发色底物） 四、 阻遏蛋白的作用机制 1、阻遏蛋白结构 38KD，4 聚体， 一个亚基结合一个IPTG分子 lacI 组成型转录 Pi 弱启动子， 5－10个／cell 具有二重性 阻止转录（与lacO结合） 开始转录（与诱导物结合） 阻遏蛋白的结构域 头段：-NH2端，lacO结合区（大沟） 绞链区： 核心段：诱导物结合 -COOH： 两组亮氨酸拉链，形成四聚体。 4个亚基的核心片段接触形成四聚体 阻遏蛋白单体的结构 等位基因间的互补 （interallelic complementation）。 负的互补（negative complementation） lacI-d的产物和lacI+的产物组成多聚体时，阻遏蛋白无活性。 反式显性（trans-dominant） 显性失活（dominant negatives） Mutations map the regions of the lacl gene responsible for different functions. The DNA-binding domain is identified by lacI-d mutations at the N-terminal region; lacl- mutations unable to form tetramers are located between residues 220-280. Other lacI- mutations occur throughout the gene. lacIs mutations occur in regularly spaced clusters between residues 62-300. 4、阻遏蛋白对RNA