负载肝素酶复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定.pdfVIP

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2018-04-07 发布于北京
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负载肝素酶复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定.pdf

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· 38· ·实验研究· 负载肝素酶复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定陈陵蔡永国郑兴春杨仕明房殿春罗元辉王东旭摘要 p亡C315hpa与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaEl，3cre共转染人胚。肾293细胞(HEI(293)，包装Adhpa，并大量扩增，收集纯化。对纯化后的Ad_hpa进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PcR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性，纯化浓 Ad-hpa可扩增出Ad及hpa特异片段，而对照则不能扩增出hpa片段。结论成功包装了负盘。关键词肝素酶；腺病毒科；复制缺陷型腺病毒载体；转染中国图书资料分类号Q782 aIldid印tificati叫of of PacI‘age 11epncatim_卜dencientre!oombimmt龇Ie】【lovi九塔∞币l髑i蚰VectorhuIT岫h巾m铷慨船 Chen GastrointestinalCenterofPLA，SOuthwest Ling，CaiYOngguo，Zheng)(ingchun以吐 Medical 400038，Chim Military University，Chongqing Abstract 1bconstructa recombimntadenovirus vectorofhuHlan o嗡ective replication_deficient expression odsThe clonedatthedo、vnstreamofCMV oftheadenoviralshuttle 5insensedirection，andthe hpageneⅥ阻s pronloter plasnlidpI)C31 into ade resultantrecombillant wastransfectedHEK293cell plas而dpDC315一hpa together而thplasrnid noviral the recombinantadeno访nJs vectorof obtained，anditwasidentified genome，thenreplicatior卜deficient expressionhpa(Ad-hpa)was infection observationandPCR R巧IlltsAfter andconcintration，thetiterof test，electmnic purification by ndcmscope amplificatiorL Ad-hpa be in ofviⅢs in reached5×1010 couldfoundvirusconcintrationsolution，and wasobsen，edHEK293 pfu／n11．Ⅵrusparticles replication cellswasobsen，edurldertmnsTIlissionelectron adenovirusand couldbe from rIlicroscope．Ebth hpaspecialfragment amplifiedAd—hpaby couldnotbe fmmthecontml．嘶ldl塔i伽The