生物化学第二章节蛋白质化学上课件幻灯片.pptVIP

α-螺旋（α-Helix）结构要点： 多个肽键平面通过α-碳原子旋转，绕一条固定轴形成右手螺旋（N-端至C-端方向） 每3.6个氨基酸残基上升一圈，相当于0.54nm,每个残基绕轴旋转100°，沿轴上升0.15nm 相邻两圈螺旋之间借肽键中C＝O和N-H形成许多链内氢健，即每一个氨基酸残基中的NH和前面相隔三个残基的C＝O之间形成氢键（1-5），这是稳定α-螺旋的主要键, 平行。 肽链中氨基酸R侧链，分布在螺旋外侧 1-（aa）3-5 * 影响α-螺旋稳定的因素： R基大小：较大的R(如苯丙氨酸、色氨酸、异亮 氨酸)、Gly空间占位很小， 电荷：带同种电荷的R基无法形成 Pro存在 出现“拐角”。 （2）β-折叠结构（ β-pleated sheet）又称β-片层 顺向平行 反向平行 N末端 N末端 N末端 C末端 0.7nm ?-折叠结构（A：顺向平行，B：反向平行) 结构要点如下： 多肽链呈锯齿状（或扇面状）排列成比较伸展的结构； 有平行式和反平行式两种， 相邻两个氨基酸残基的轴心距离反平行为0.35nm，平行为0.325nm，侧链R基团交替地分布在片层平面的上下方 所有肽键的C=O和N—H形成链间氢键，方向：与轴垂直； （3）β-转角（ β-turn） 又称β-弯曲（β-bend）或发夹结构(hairpin structure) 指蛋白质的多肽链在形成空间构象时经常会出现180°的回折，回折处的结构就称为β-转角。一般由四个连续的氨基酸组成，第一个残基的C＝O与第四个残基的N－H形成氢键。 1-（aa）2-4 R R O O C C C C C H H N N O C C H N ?-转角示意图 ?-转角常出现在肽链呈180°回折处，多由4个氨基酸残基组成，第1个氨基 酸的羰基氧与第4个氨基酸残基的氨基氢形成氢键。 ?-转角的第2个氨基酸 多为脯氨酸。 三 纤维状蛋白结构（fibrous protein） 基本支架和保护成分 1 α-角蛋白 α- 螺旋 卷曲螺旋 原纤维 初原纤维 中间纤维 毛发 2X 2X 2X 4X 3Xα-螺旋-----原胶原纤维----聚合成胶原蛋白 Gly-X-Y；羟脯氨酸/羟赖氨酸；羟化酶（Fe2+ 、Vc保护作用） 4 一级结构研究 测序前提： 样品必须是均一的(纯度大于97%) 必须知道它的相对分子量，其误差允许在10%以内 过程 1.测定蛋白质分子中多肽链的数目 　 2.拆分蛋白质分子的多肽链 　　 3.断开链内二硫键 　　 4.分析每条多肽链的氨基酸组成比及数目????? 5.鉴定多肽链的N、C瑞残基 　 6.裂解多肽成小的肽段 　 7.测各肽段的氨基酸序列 　 8.重建完整多肽链的一级结构 　 9.确定二硫键的位置 ① N末端 测定 二硝基氟苯（DNFB）法：（Sanger法） 肽游离末端NH2与DNFB反应生成DNP-肽→黄色DNP-氨基酸 丹磺酰氯（DNS）法： 用DNS取代DNFB，生成DNS-氨基酸 苯异硫氰酸（PITC）法：（Edman法） 生成PTH-氨基酸，从肽上断裂下来 氨肽酶法：外切酶，但效果不好 氨肽酶法 氨肽酶是一类外切酶，它从肽链的N末端逐个向里切。 最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶 也会遇到N末端氨基封闭，用焦谷氨酸氨肽酶处理。 ② C-端 测定 肼解法： 最重要的化学方法，肽与肼反应，除C-末端氨基酸游离外，其他氨基酸转变为氨基酸酰肼化物 还原法： C-末端氨基酸用硼氢化锂还原成相应的α-氨基醇 羧肽酶法： 最有效、最常用 羧肽酶A 羧肽酶B 羧肽酶Y 羧肽酶C 氨基酸酰肼可以与苯甲醛作用变成水不溶性二苯基衍生物而沉淀 Gln Asn Cys等不易测出，末端Arg变成鸟氨酸 羧肽酶法 本方法目前最有效。 从羧基端开始向里逐一水解蛋白质 羧肽酶A：释放除Pro，Arg和Lys以外的所有C-末端残基 羧肽酶B：只水解以碱性Arg和Lys为C-末端的肽键 羧肽酶A可以切割C端除了Lys、Arg、Pro的氨基酸 　　羧肽酶B可以切割C端的Lys或Arg 　　但如果倒数第二个氨基酸为Pro两种羧肽酶均不能作用 ③ 二硫键的拆分 氧化法：过甲酸 还原法：巯基化合物还原 此外，还需要加8mol/L 尿素或6mol/L的盐酸胍，使蛋白质变性； 生成的巯基要用碘乙酸等烷化剂保护。 氨基酸组成的测定