第二章节_发酵菌种选育幻灯片.pptVIP

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菌种筛选方案? 初筛:目的是删去明确不符合要求的大部分菌株,把生产性状类似的菌株尽量保留下来,使优良菌种不致于漏网。初筛工作以量为主,测定的精确性还在其次。初筛的手段应尽可能快速、简单。 复筛的目的是确认符合生产要求的菌株,所以,复筛步骤以质为主,应精确测定每个菌株的生产指标。 菌种筛选的手段 初筛 从菌体形态变异分析 平皿快速检测法?具体的有纸片培养显色法、变色圈法、透明圈法、生长圈法和抑制圈法等 摇瓶培养法摇瓶培养法也可用于初筛。?初筛的摇瓶培养一般是一个菌株只做一次发酵测定,从大量菌株中选出10-20%较好的菌株,淘汰80-90%的菌株;而复筛中摇瓶培养一般是一个菌株培养3瓶,选出3-5个较好的菌株,再做进一步比较,选出最佳的菌株。 特殊变异菌的筛选方法? 营养缺陷型突变株的筛选 ?经诱变处理后的菌悬液在筛选前一般应先进行诱变后培养,以促使变异细胞发生分离,防止出现表型延迟现象,筛选出不纯的菌株。营养缺陷型的筛选一般包括浓缩、进一步检出和鉴别营养缺陷型等步骤。 ? 抗性突变菌株的筛选?抗性突变株的筛选相对比较容易,只要有10-6频率的突变体存在,就容易筛选出来。抗性突变株的筛选常用的有一次性筛选法和阶梯性筛选法两种手段。 组成酶变异株的筛选? 许多水解酶是诱导酶,只有在含有底物或底物类似物的培养环境中,微生物才会合成这些酶类,所以,诱导酶的生产不仅需要诱导物,而且受到诱导物的种类、数量以及分解产物的影响。 具体的筛选方法有恒化器法、循环培养法和诱导抑制物法。 1)?恒化器法:常被用于微生物的“驯化”。在培养基中添加不能起诱导作用的低浓度底物,菌生长速率极慢,而群体中少数组成型变异株则可合成有关的酶,分解利用该底物,生长速率较快。 为了提高组成酶变异株的优势,即它在群体中的比例,可以应用恒化器培养技术。随着恒化器培养中不断加入新鲜基质而逐渐增大组成酶变异株的优势,这样就能够比较容易地做进一步的纯化分离。? 2)?循环培养法:利用不含诱导物的培养环境和含有诱导物的培养环境进行交替循环培养待分离的菌悬液,从而使组成酶变异株得到富集。 当接种到不含诱导物而含有其它可利用碳源的培养基中时,两种类型菌株同样能较好地生长,但在此环境中组成型突变株已能合成有关的水解酶,而诱导型菌株就不能合成。 ? 将它们转接入含诱导物的培养基中时,变异株能迅速利用诱导底物进行生长繁殖,而诱导型出发菌株需经历一个诱导合成酶的阶段,两类菌株的生长就不同步,组成酶变异株所占的比例将逐渐增大。 3)?诱导抑制剂法:有些化合物能阻止某些诱导酶的合成,当在诱导物和诱导抑制剂同时存在的培养环境中培养待分离菌群时,诱导型菌株不能产生诱导酶,无法正常生长,只有组成型变异株能够利用底物进行生长繁殖。 空间诱变 近年来用宇宙系列生物卫星、科学返回卫星、空间站及航天飞机等空间飞行器,进行搭载微生物材料的空间诱变育种是培养新的生物菌种的一种有效方法. 近年空间诱变的研究进展迅速,已涉及到形态学、细胞学、生理生化、分子生物学等领域。并开始进行地面模拟失重实验。 空间诱变 空间环境的主要特征为微重力、空间辐射、超真空和超净环境等。 一般认为空间诱变的主要因素有以下几个方面: 微重力。影响细胞分裂细胞运动、细胞间信息传递、光合作用和生长发育等生理生化过程。引起遗传物质的改变。 微重力通过提高生物对诱变剂的敏感性和抑制DNA 损伤的修复,加剧生物损伤并提高变异率。 空间诱变 一般认为空间诱变的主要因素有以下几个方面: 太空辐射 空间诱变与地面辐射处理发生的变异情况有许多类似之处, 辐射敏化剂预处理能增加生物损伤。 空间诱变——卫星中微生物生长的情况 某种链霉菌搭载后其菌落生长加快(比地面对照快6 倍) 悬浮生长的微生物细胞在空间与在地面以不同的速度繁殖。 微重力可以使许多微生物生长加快1 倍以上。因为在微重力条件下,空气中的氧可以均匀地供给细菌应用。这表明了在空间生产生物制品的优越性。 空间诱变 真空度的提高会导致孢子突变频率的提高,但对质粒DNA无影响。宇宙射线会导致DNA链的断裂而促使生物发生突变。 神七:搭载“神七”进入太空的87个品系的蔬菜种子主要有辣椒、茄子、番茄、黄瓜、萝卜等5类 。 清华大学搭载了新型生物材料、生物燃料、医药和食品的重要微生物菌种,主要用于“工业生物技术”研究领域。 中国科学院搭载了用于空间生命科学实验的南芥、番茄等材料,主要用于空间微重力对高等植物基因表达影响的研究,实验研究结果将为今后载人航天事业的空间保障系统的建立提供科学依据。 中国林科院搭载了多种林草类种子,将用于国家“863”计划、国家自然科学基金等项目的研究工作,其研究成果对城市园林绿化的植物配置、对恶劣生态环境的生物恢复等有着相

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