专题2.1 微生物的实验室培养（课件）-2017-2018学年高二生物同步精品课堂（基础版）（选修1）.ppt

课题1微生物的实验室培养 选修1专题2 固体培养基 半固体培养基 液体培养基 主要用于微生物的分离、计数等 主要用于观察微生物的运动、鉴定菌种等 主要用于工业生产 需加入凝固剂，如琼脂 一、基础知识 （一）培养基 2.种类 1.概念：由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养基质。 营养物质 含义 主要来源 碳源 提供碳元素的物质 无机物：CO2、NaHCO3；有机物：糖类、脂肪酸、石油、花生粉饼等 氮源 提供氮元素的物质 无机物：N2、NH3、氨盐、硝酸盐； 有机物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等 水 细胞生命活动必不可少的物质 培养基、大气、代谢产物 无机盐 提供除碳、氮元素以外的各种重要元素 培养基、大气 培养基还需要满足不同微生物生长对PH、氧气、特殊营养物质的要求： 3.成分 【典型例题】 有关培养基配制原则表述正确的是（ ） A. 任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水及生长因子 B. 碳源和氮源必须具有一定比例，碳元素的含量最多，其次为氮元素 C. 微生物的生长除受营养因素影响外，还受到pH、氧、渗透压的影响 D. 营养物质的浓度越高越好 C （二）无菌技术 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 无菌操作是培养微生物成功的关键！ （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 ； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近旁进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品 相接触。 1.主要方面 2.消毒与灭菌的比较 项目 理化因素作用强度 消灭微生物数量 芽孢和孢子是否消灭 消毒 灭菌 温和 强烈 部分微生物 全部微生物 不能 能 ①煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min ②巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min ③化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源 ④紫外线30min消毒：照射前，可喷石炭酸或煤酚皂等消毒液加强消毒效果 (1)消毒的方法： 3.常用的消毒与灭菌的方法 (2)灭菌的方法： ①灼烧灭菌：接种环、接种针、试管口、瓶口 ②干热灭菌：玻璃器皿和金属用具 ③高压蒸气灭菌： 100kPa、121 ℃下维持15-30min 【典型例题】 关于消毒和灭菌的不正确理解是（ ） A. 灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、包括芽孢和孢子 B. 消毒和灭菌实质上是相同的 C. 常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 D. 常用消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线法、化学药物法 B 三、实验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨培养基 1 计算：根据配方比例，计算100mL培养基各成分用量。 2 称量：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。 3 溶化：①加水加热熔化牛肉膏；②加入蛋白胨和氯化钠继续加热；③加入琼脂；④用蒸馏水定容到100mL。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。 4.灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。 5.倒平板：待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。 【方法点拨】倒平板的方法及注意事项 ①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞； ②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰； ③左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。 ④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。 （二）纯化大肠杆菌 最常用的接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法。 1.平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面。 在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落。 分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选菌株的最简便方法之一。 【方法点拨】平板划线操作方法 1 2 3 4 5 6 7 8 接种环在火焰上灼烧直至烧红 火焰旁冷却接种环，打开菌液试管的棉塞。 将菌种试管口通过火焰 将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种。 将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。 将皿盖打开一条缝隙，把接种环伸入平板内划3～5条平行线，盖上皿盖，不要划破培养基。 将平板倒置放在培养箱中培养。 【注意事项】 1.接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次。 2.划线首尾不能相接。 3.划线后，培养皿倒置培养12~24h。 线条不重叠 从上次的末端开始，交叉2~3条 最后的划线不能与第一区相连。 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼