GFP功能性包涵体技术介绍.ppt

GFP折叠突变体指示功能性包涵体产量;研究背景 研究目的及意义 结果分析 结论 致谢 ;1.研究背景;;包涵体;功能性包涵体;影响功能性包涵体形成的因素;可以形成功能性包涵体的模式蛋白包括： β-半乳糖苷酶(β-galactosidase) D-氨基酸氧化酶(D-amino acid oxidase) 麦芽糊精磷酸化酶(maltodextrin phosphorylase) 绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP) ;选择GFP作为报告蛋白的原因; 四种GFP折叠突变体;2.研究目的及意义;一、分析四种GFP突变体蛋白的光谱学性质与荧光强度； 二、分析四种GFP突变体蛋白对不同变性剂的耐受性，探明不同突变体的折叠稳定性； 三、GFP折叠突变体与ELK16融合表达，诱导其形成功能性包涵体； 四、比较四种GFP突变体所形成的包涵体产量，探明蛋白折叠性与包涵体产量的相关性； 五、比较形成包涵体的全细胞的荧光强度和体外纯化包涵体的荧光强度，探明蛋白折叠性与包涵体活性的相关性。 ;3.结果分析;图1 EmGFP 、SeGFP、sfGFP的氨基酸序列比对;图2 cpGFP的氨基酸序列;3.2 四种GFP重组蛋白的表达与纯化;3.3四种绿色荧光蛋白的光谱扫描;图4-5 纯化蛋白EmGFP 、SeGFP、cpGFP、sfGFP的激发和发射光谱 A：激发光谱 ； B：发射光谱;3.4 四种GFP纯化蛋白荧光强度与折叠稳定性检测;图6 尿素和盐酸胍对GFP突变体的稳定性分析;3.5 四种GFP功能性包涵体的定性与定量分析;图4-9 沉淀与细胞的湿重比值 ;4.6功能性包涵体的激光共聚焦显微镜分析;4.7 FTIR分析功能性包涵体的二级结构;4.8不同温度条件下GFP-ELK16重组细胞荧光强度的动态分析;图4-13 不同温度诱导重组细胞的OD600;4.9 功能性包涵体的活性分析;4.10 包涵体的形成对细胞生长的影响分析;4.结论 ;1. EmGFP 、SeGFP、cpGFP、sfGFP的光谱学性质没有较大差异； 2. ELK16可有效诱导GFP功能性包涵体的形成，且不影响重组细胞的生长； 3. 功能性包涵体产量与活性不可兼得； 4. 蛋白质的折叠稳定性与包涵体的产量呈反相关性； 5. 功能性包涵体的活性不仅受蛋白折叠稳定性的影响，蛋白质中特定氨基酸位点突变可提高功能性包涵体的生物活性。 ;5.致谢;请各位评委老师批??指正 并提出宝贵意见！ 谢谢！