RNA检测技术在生殖道病原体诊断中的应用(检验科2018072课件）培训资料.pptVIP

生殖道病原体实验室检测方法 细菌法 免疫法 分子生物学法 培养法 镜检法 抗原抗体检测 DNA检测 RNA检测 方法学 检测方法 检测样本 检测复杂程度 特点 检测项目 细菌法 培养法 细菌培养 分泌物 较复杂，检测过程长 准确率低，易漏检及误检 用于NG/UU/CT/MG检测 形态学法 涂片镜检 分泌物 全手工操作，较复杂 准确率较高，但有漏检 用于NG检测 免疫法 免疫法 胶体金/ 酶联免疫法 分泌物 耗时短，操作简单 准确率低，假阴性问题突出 用于CT检测 分子生物学法 DNA检测 PCR 分泌物 操作较复杂，需有一定经验才能做好检测 准确率相对较高，但存在污染和死亡病原体导致的假阳性问题 用于CT/NG/UU检测 RNA检测 TMA/SAT 尿液和分泌物 耗时耗时短，仪器自动化操作，较简单 检测活体RNA，灵敏度和特异性均很高 欧美国家用于CT/NG/MG检测 常用CT/NG/UU/MG检测方法比较 WHO性传播疾病实验室诊断指南 利用16S rRNA为靶标的RNA检测技术（TMA），在灵敏度上比PCR要高，它是目前一种灵敏度、特异度均非常高的MG检测技术。 Unemo et al. Laboratory diagnosis of sexually transmitted。a.infections, including human immunodeficiency virus, WHO,2013 WHO明确指出核酸检测法（NAAT）是诊断MG的唯一可行方法;通过RNA检测技术检测生殖支原体比PCR方法要更准确。 核酸检测法（NAAT）是诊断MG的唯一可行方法 WHO推荐用RNA技术检测MG RNA用于临床检验的优势 灵敏度高，不易漏检：RNA 拷贝数≥ DNA拷贝数（ e.g，16s rRNA 104copy/cell ） 与临床相关性好，可以区分“死菌”“活菌”：病原体死亡，RNA很快降解，可进行疗效评估和辅助判愈，减少无效治疗，比如抗生素滥用。 无创取样：尿液检测，显著降低病人的采样痛苦和检测依从性。 不易误检：靶标和扩增产物都是RNA，不易污染，不易出现假阳性。 RNA检测技术 NASBA（Biomerieux）(NA sequence based amplification) TMA（Gen-probe）(Transcription Mediated Amplification) SAT（上海仁度)（Simultaneous Amplification and Testing) SAT技术 SAT与PCR技术原理比较 RT RNA cDNA RT ~1000 copies T7 SAT DNA Taq Taq PCR 30分钟内 扩增1010倍 中国诊疗指南推荐 用SAT诊断生殖道病原体 梅毒、淋病、生殖器疱疹、生殖道沙眼衣原体感染诊疗指南。 中国疾控中心、中华医学会皮肤性病学分会性病学组。2014。 中国 2014版 《梅毒、淋病、生殖器疱疹、生殖道沙眼衣原体感染诊疗指南》 CT/NG/UU/MG-SAT 是国内唯一获得CFDA认证的RNA检测试剂 SAT扩增曲线图 （ABI 7500） 阴性结果 阳性结果 以CT-SAT为例 SAT技术可实现尿液检测 样本类型：宫颈拭子、尿液 金华中心医院 浙大医学院附属妇产科医院 临床结果显示拭子和尿液标本检测阳性率基本一致。 郑雅萍 ?袁青 ?陈伟,实时核酸恒温扩增技术在奈瑟菌感染检测中的应用,《浙江实用医学》, 2015年01期? 沙眼衣原体 淋病奈瑟菌 编号 作者 发表时间 研究中心 病例数 项目 灵敏度 特异性 诊断标准 1 王千秋 等 2010 中科院北京协和医学院皮肤 病研究所 205 NG 100% 94.5% PCR 2 顾伟鸣 等 2010 上海市皮肤病性病医院 229 CT 97.1% 100% 培养+PCR 3 高志华 等 2012 东莞市南方医科大学广济医院 218 NG 100% 97.08% 培养+PCR 4 陈敏 等 2014 湖南省妇幼保健院, 解放军163医院 200 CT 88.12% 100% 培养+PCR 5 郑雅萍 等 2015 金华市中心医院 153 NG 95.9% 88.8% 分离培养 SAT技术具有高灵敏度，高特异性 男科多种样本类型检测（课题） 仁度CT/NG/UU/MG RNA检测试剂用于精液检测 采用SAT技术对438例男性精液标本进行CT/NG/UU/MG检测 结论： 1、SAT技术可对精浆标本进行CT/NG/UU/MG检测。 2、与医院传统检测方法相比，传统检测方法阳性标本，SAT检测均为阳性；同时SAT还比传统方法多检出阳性标本。