[临床医学]第二十章 免疫检验自动化仪器分析一.ppt

第二十章  免疫检验自动化仪器分析 1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。 3.按log-logit转换或y=ax3+bx2+cx+d方程进行曲线拟合，制备剂量-反应曲线，由计算机处理，计算出抗原浓度。 （三）方法评价 优点: 灵敏度高，稳定性好，操作简便，结果准确 （二）方法评价　 本法敏感度大大高于普通比浊法，可达ng/L水平，操作简便，易自动化；血清中的类风湿因子(RF)可与IgG Fc段结合，使IgG致敏胶乳颗粒出现非特异性凝集，用F(ab′)2片段代替IgG既可消除此干扰，又可克服IgG致敏胶乳的自凝现象；免疫胶乳轻度自凝或抗体活性降低会严重影响结果。 1. 仪器测定技术要点 (1) 抗原抗体预反应阶段 (2) 反应阶段 (3) 信号检测 　2. 抗原过量检测 　(1) 抗体适当过量 　(2) 对抗原过量进行阈值限定 仪器测定技术要点 开启机器，进行定标 反应阶段 抗原过量检测 (三)方法评价 散射比浊法是目前临床应用较多的一种方法，本法自动化程度高，具有快速、灵敏、准确、精密等优点。采用抗原过量检测方法，保证了结果的准确性。但仪器和试剂价格比较贵, 对抗体的质量要求很高。 　1.抗原抗体比例 　2.抗体的质量 　3.增浊剂的使用 4.伪浊度 5.入射光光源和波长 6.结果报告中的计量单位 7.标准曲线制备与质量控制 　（二）临床应用 免疫比浊分析法主要用于检测免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、κ链、λ链、免疫球蛋白亚类；补体C3、C4；血浆蛋白如前白蛋白(PAB)、白蛋白(ALB)、α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)、β2-微球蛋白(β2-MG)、转铁蛋白(TRF)、铜蓝蛋白(CER)、结合珠蛋白(HP)、，C-反应蛋白(CRP)、载脂蛋白ApoAI、ApoB、脂蛋白(a)、类风湿因子(RF)、尿微量蛋白系列和某些治疗性药物浓度等。 仪器测定技术要点 抗原抗体结合 洗涤、分离 加入氧化剂发光 信号检测 　吖啶酯标记的化学发光免疫分析仪是一种用发光剂直接标记抗体或抗原的一类免疫分析法。该仪器利用化学发光技术和磁性微粒子分离技术，以吖啶酯为化学发光剂，以细小的顺磁性微粒为固相载体。其测定原理与双抗体夹心法、双抗原夹心法和竞争结合法等相同。 　一、吖啶酯标记化学发光免疫分析仪? Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y 顺磁性微粒示意图 磁微粒技术 磁微粒在 电磁场中分离 磁微粒标记抗体 发光 Y Y Y 磁微粒 被测抗原 + 抗体 + 带丫啶酯标记物抗体 Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y 冲洗后 双抗体夹心法 直接化学发光的机理 （1） 加入酸性H2O2 （pH10） （2） 加入碱 （pH10） * * 免疫检验自动化 （automation of immunoassays) 是将免疫学反应检测过程中的取样、加试剂、混合、温育、固相载体分离、信号检测、数据处理、打印报告和检测后的仪器清洗等步骤由计算机控制，自动化进行。 第一节 自动化免疫浊度分析系统 免疫浊度分析的基本原理是：抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分子免疫复合物（19S），在增浊剂（如PEG、NaF等）的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（19S），使反应液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复合物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。 　一定波长的入射光线通过抗原抗体反应后的溶液时，被其中的免疫复合物微粒吸收、反射和折射而减弱，在一定范围内，吸光度与免疫复合物量呈正相关，而形成的免疫复合物量与参与反应的抗原和抗体的量呈函数关系。与已知浓度的抗原标准品比较，可确定标本中抗原含量。 一、免疫透射比浊法 （一）原理： （二）仪器工作过程 2.将待测标本和标准抗原溶液（5个浓度抗原标准品）与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗原抗体反应完成后，在340nm处测定各管吸光度。 不足: ①抗体用量较大； ②溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大 ③透射比浊测定在抗原－抗体反应的第二阶段，检 测需在抗原抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。 用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒（一般为0.2 μm），在遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝聚 ，使透射光和散射光即出现显著变化。如图所示：a为单个胶乳颗粒不阻碍光线透过，b为抗原抗体结合形成的凝聚胶乳大颗粒使透射光减弱或散射光增强。 二、免疫胶乳比浊法 （一）