铁皮石斛 组培培训材料.ppt

铁皮石斛;班级：农学121 学号：1251506104 姓名：陈旺有;铁皮石斛;铁皮石斛(Dendrobium officinale)是兰科(Orchidaceae)石斛属(DendrobiumSw．)多年生草本植物。铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛是传统名贵中药材，有生津益胃、清热养阴和清咽利嗓等功效，主要药用成分石斛多糖是一种免疫调节剂。铁皮石斛蒴果成熟时易开裂，且种子粒径小，自然繁殖率低。为了保护和有效利用铁皮石斛，通过组织培养技术大量快速繁殖铁皮石斛组培苗显得尤为重要。 ;铁皮石斛的用途： ???? 铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo），为兰科石斛属多年生草本植物，分布于气候温润的南方山区，附生在半山腰阴湿岩缝、老树表皮，生存温度为–5℃～36℃，生长温度为15～30℃。其茎枝富含石斛多糖、甘露糖、氨基酸、微量元素、菲类化合物等成分，具有提高免疫、增强记忆、延缓衰老、防治眼病、保护嗓子、降压降糖、防癌抗癌、抑制血栓形成等作用。铁皮石斛口感清香、淡甜、细滑，耐人寻味，人们往往直接嚼食、泡茶饮用、烹调美味滋补药膳。现阶段被制成口服液、颗粒剂、软胶囊等服食。铁皮石斛枝叶奇特、花型秀美，极具观赏价值。道家经典《道藏》把铁皮石斛、天山雪莲、三两重人参、百二十年首乌、花甲之茯苓、苁蓉、深山灵芝、海底珍珠、冬虫夏草列为中华九大仙草，而铁皮石斛被冠以九大仙草之首，因而成为历代宫廷贡品，为历年版《中华人民共和国药典》所收载。 ;??? 市场现状： ???? 全国中药资源普查显示，铁皮石斛鲜品的市场年需求量在万吨左右，且每年递增15%。鲜品收购价每公斤在1000元以上，加工成铁皮枫斗后每公斤销售价达18000元，是石斛属植物中最名贵的物种。但铁皮石斛自然繁殖能力极低，疯狂的采挖导致野生资源日见稀少，被国家列为二级濒危保护植物。目前，人工繁育种植技术趋于成熟，但主要集中在少数企业运作，投资成本高，种植面积少，其产量难以满足市场需求，混淆品充斥市场。;;（1）外植体诱导培养基。 培养基：MS+BA 0.0~2.0 mg/L（单位下同）+NAA 0.1~2.0 mg/L； 培养基：MS+BA 0.0~2.0 mg/L+IBA 0.1~2.0 mg/L； 培养基：MS+BA 0.0~2.0 mg/L+IAA 0.1~2.0 mg/L。 （2）增殖培养基。 培养基：MS+BA 0.2~2.0 +NAA 0.1~2.5+土豆汁10%~50%。 培养基：MS+BA 0.2~2.0 +NAA 0.1~2.5+香蕉汁10%~50%。 （3）生根培养基。 培养基：1/2MS+NAA0.0~2.5+土豆汁10%~50%+活性碳 0~10‰； 培养基：1/2MS+NAA0.0~2.5 mg/L+香蕉汁20%+活性碳 0~10‰ （4）其他培养条件。 所有培养基中添加蔗糖3%，卡拉胶6.8 g/L，pH值5.2~5.6。培养温度 23~25℃，光照强度2000 lx，光照时间10 h/d。;灭菌 1培养基灭菌 1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防事故发生； 2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均匀地扭紧螺丝； 3）打开电源和排气阀，调节电压至220V； 4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后，关闭排气阀； 5）当温度上升到121℃后，调节电压至135V，保持20min； 6）关闭电源，使之自动降温至0℃。10min后，打开排气阀和锅盖； 7）5—10min后，取出培养基放于试验台上冷却，待用。;2外植体灭菌 ①原材料清洗 选择生长旺盛、无病害的铁皮石斛健康植株，每2 节为一段放入500ml 的烧杯中，加入少量洗衣粉，用纱布单层棚扎杯口，然后用工程线扎紧，放在自来水龙头下冲洗30min，冲水量调整到能使铁皮石斛茎段在水中漂动为好。 主要作用是洗去外表尘土和大颗粒菌落、菌丝等。 ②材料二次消毒灭菌 将上述完成后的材料带到无菌室超净工作台上，进行二次消毒灭菌: 将茎段腋芽的苞叶拨去。70% 的酒精速浸25s， 用0.1%的升汞溶液浸泡10min 用无菌水冲洗5 次，灭菌过程中不断摇动烧杯使灭菌更加彻底，以去掉表面药物残留。 ;转接 2.1转接前准备 1）培养皿、镊子、剪刀等转接用具的灭菌（可以在培养基灭菌时附带）； 2）检查超净台内各种用具，及时补充酒精灯的酒精，确保用具齐全； 3）放置待转接材料和待接入培养基，以“方便操作为宜”而陈列； 2.2转接 1）揭去防尘膜，打开电源、通风和紫外灯，灭菌15—20min； 2）关掉紫外，打开白炽灯，用75%酒精仔细擦拭手指、指甲、材料瓶瓶盖及盖边缘、工作区等处，确保“消毒”彻底；