[农业]鸡毒害艾美尔球虫早熟耐药株的诱导及生物学特性研究原件.doc

鸡E.necatrix早熟耐药株的诱导 及生物学特性研究为了研制既具有良好的免疫原性，又不受具有抗球虫作用的抗菌类药物影响的高效球虫疫苗，试验结果表明： （1）用E.necatrix P8为母株，成功诱导出对土霉素1600mg/kg饲料产生抗药性的毒害艾美耳球虫株，对制菌磺2000mg/kg饲料产生抗药性的毒害艾美耳球虫株对制菌磺1800mg/kg饲料及土霉素1600mg/kg饲料均产生抗药性的交叉早熟耐药虫株。 （2）耐药株耐药株耐药株接种耐药株96h出现成熟第二代裂殖体，108h数量达到高峰，较P0出现早且变小，120裂殖体数量下降，至132h左右可见大、小配子体、及少量合子；在1h的盲肠粘膜涂片上有卵囊形成，在156h时卵囊产量达高峰接种剂量0.5×104个/只时耐药株达到产卵高峰，当接种大于0.5×104时产卵总量呈现下降趋势每个卵囊的繁殖力则随着接种剂量的增加而减少；剂量0.01×104个/只时每个卵囊的繁殖能力最大耐药株耐药株4个P0孢子化的卵囊进行攻毒，早熟耐药株卵囊减少率为79.77%；以10×104个P0孢子化的卵囊进行攻毒早熟耐药株病变记分降低率为78.42%，且平均病变记分≤1，血便记分≤1，鸡只无死亡，与P8、P0的免疫力相当。总体看来，早熟耐药株为确定的最小免疫剂量，以不同剂量对雏鸡于4日龄进行了一次和14日龄二次免疫饲料中浓度为1800mg/kg制菌磺和1600mg/kg土霉素时，最小免疫剂量为300个/只个/只。（）E.necatrix早熟耐药株于4℃条件下保存，保存15个月时卵囊仍然有活力，平均每个月卵囊活力下降6.13%。最小免疫剂量为00个/只个/只。E.necatrix亲本株（P0）；早熟株（P8）；早熟耐药株；土霉素；制菌磺；鸡球虫病是球虫卵囊寄生于鸡肠道黏膜上皮内引起的一种原虫病[1]，是造成现代养禽业经济损失最大的疾病之一，全球每年因该病引起的损失高达80亿美元[]，我国年养肉鸡数为30亿羽～60亿羽，每年用于抗球虫药的费用高达6亿～18亿元人民币[]。，其中毒害艾美尔球虫E.necatrix）是9种鸡球虫中致病力的，其无性生殖阶段可导致鸡的中后段肠上皮细胞大量破坏和严重出血，影响营养物质的吸收并易引起继发性坏死肠炎，常导致巨大的经济损失[]。 [5,6] ，几乎所有的抗球虫药均有耐药虫株的出现，且表现出对与该药同类或作用机理相同的其他药物产生一定程度的交叉耐药性[7]；药物残留问题，在日益关注食品安全背景下，无残留食品的生产将是新世纪现代人追求的目标[8]；对免疫力产生抑制。 当前，世界上已有多种疫苗问世，包括强毒株和弱毒株卵囊及基因工程苗为鸡球虫病的防制开辟了一条崭新的途径鸡球虫耐药性自Levine[]发现磺胺类药物对鸡球虫病有疗效Grumbles[13]首先用磺胺喹噁啉药预防鸡球虫病以来又陆续发现其他药物如呋喃类、生物碱类、离子载体类等药物都能用来防治球虫病。已报道的抗球虫药达50余种其中一些药物由于毒性太大或疗效不佳而被淘汰。1.1.1干扰虫体生物膜离子转运的药物 　 土霉素[是广谱抗生素，广谱抗菌药，对革兰氏阳性和阴性菌都有作用。常用于鸡白痢、鸡伤寒、禽霍乱、慢性呼吸道病、球虫病、螺旋体病、大肠杆菌病等。它主要抑制蛋白质合成时的肤链延长，此外它还可以阻止己合成的蛋白质肤链释放，作用于球虫的第1, 2代裂殖体，预防量 0. 02%，治疗量0. 02%+0.18钙，作用峰期为感染后第2, 3天。1.1.2影响辅酶吸收和合成的药物 　 制菌磺[]属于磺胺类抗菌药，常用于呼吸道和消化道的细菌性感染，也可用于球虫病的防治。它可与对氨基苯甲酸竞争二氢叶酸合成酶，影响二氢叶酸的合成，最终阻碍核蛋白的合成，使球虫细胞的生长发育受到抑制，作用于第2代裂殖体，预防量0. 02%，治疗量0. 05%，作用峰期为感染后第4天。1.1.3抑制虫体线粒体功能的药物 　 [17]研究指出，球虫线粒体的电子转运存在两种不同终端氧化酶的生化途径，一条途径对低浓度的癸氧喹酯敏感，其可能存在一对癸氧喹酯具有高亲和力的位点；另一条生化途径终止于细胞色素氧化酶，而球虫对氯羟吡啶的耐药性与aa3型细胞色素氧化酶使电子发生转向有关，认为氯羟吡啶可能作用于这条生化途径。 1.1.4作用于虫体类质体的药物 　 1.1.5抑制核酸合成的药物 　 现代理论认为耐药性的产生是在药物的选择压力下由原本据存于球虫群体中的突变个体多次重复选择的结果。自发现球虫的耐药性以来许多学者就其产生机制从细胞、亚细胞水平、代谢水平及分子水平三方面进行了深入研究[] 。 1.2.1从细胞、亚细胞水平看 　 球虫受到抗球虫药的作用其内部结构发生一系列变化线粒体发生膜性漩涡或形成髓鞘样结构内质网、高尔基体含水量增加细胞膜及核膜模糊或破损而在同样的药物浓