[农学]微生物检验的基本技术.ppt

大肠杆菌（Escherichia coli）革兰氏染色图 革兰氏染色阴性杆菌（红色） 大肠杆菌 沙门氏菌 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）革兰氏染色 革兰氏染色阳性球菌（紫色） 枯草芽孢杆菌（G+） 沙门氏菌的形态与染色特性 G-,杆菌，无荚膜和芽孢，周鞭毛（除鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌外）。 注意事项 1．革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏阳性菌。因此必须 严格把握脱色时间。 2 ．选用培养18-24小时菌龄的细菌为宜，若细菌太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。 3.干净的玻片、热固定、每一步水洗要彻底并且吸干等也是实验成功的关键。 * 裴晓方 xxpei@ * 四、生化反应 三糖铁琼脂 挑取待试菌菌落穿刺接种三糖铁底部并涂布于斜面； 置 37℃培养。 　三糖铁琼脂(TSI)成分： 　　蛋白胨 20.0g　　牛肉膏　3.0g　　乳 糖 10.0g　　蔗　糖 10.0g　　葡萄糖　1.0g 　　硫酸亚铁铵(含6个结晶水) 0.5g　　酚　红 0.025g或5g/L溶液5mL 酚红 黄5.2—7红 　　氯化钠　　　　　　　　　　5.0g 　　硫代硫酸钠　　　　　　　　0.5g　　琼　脂 12.0g　　蒸馏水 1000.0mL  酚红的PH变色与中性红相反：中性红pH4.2～6.3（红→黄），所以麦糠凯与TSI颜色结果不同。 三糖铁琼脂 斜面 产碱（红色） 底部 产酸（黄色） 产气 ＋ H2S － 反应模式表示： K／A ＋；－ 原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。 而发酵乳糖的细菌(E.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。 * 裴晓方 xxpei@ * INDOLE TEST * 裴晓方 xxpei@ * Urease test * 裴晓方 xxpei@ * Oxidase test 快速生化鉴定系统 如何使微生物的鉴定快速、准确、简易和自动化，一直是微生物工作者的研究热点。目前，已应用的快速、简便的商品化鉴定系统很多，例如法国生物-默里埃(Bio-Merieux)公司的API(analytic products Inc的简称)/ATB，瑞士罗氏公司的Micro-ID、Enterotube系统等。国内也有不少的编码鉴定以及商品化的微型鉴定系列。 API20E系统主要用于肠杆菌科细菌的鉴定，可在24小时内鉴定革兰氏阴性的杆菌108种或项（肠杆菌科、弧菌科、非发酵革兰氏阴性杆菌）。 肠杆菌科在环境中及动物产品中非常普遍，其中部份是致病性(沙门氏、耶尔森氏等) API 试剂盒及其配套试剂 (API 20E) 培养盒 保持潮湿环境 石腊油(容量: 125ml) 覆盖在指定小孔上 悬浮液 (容量: 5ml) 用於调菌液 附加试条 加进指定的生化孔内 API 20E 试条 每个小孔载有风乾的底物 PSIpettes 接种管 挑菌落，混匀及接种 安培架 操作步骤 1 (API 20E) 分离单个菌落 挑单个可疑菌落 尽量避免使用高度选择性培养基 调制菌液 悬浮液 (容量: 5ml) 操作步骤 2 (API 20E) 将菌液接种到小管或小管及小杯(CIT, VP和 GEL) 将试条放进培养盒内 将 5ml 无菌水放进培养盒里 利用石腊油覆盖指定的生化孔 (有划线的孔) ADH ODC H2S URE 把培养盖盖上（防水份蒸发） 操作步骤 3 (API 20E) 把试条放进孵育箱内，利用指定温度及时间 API20E : 35 - 37oC，18-24 小时 按操作说明书规定，将附加试剂加进适当小孔内 api20E 试剂 18-24 小时後 该系统的鉴定卡是一块有20个分隔室的塑料条，分隔室由相连通的小管和小杯组成，各小管中含有不同的脱水培养基、试剂或底物等，每一分隔室可进行一种生化反应，个别的能进行两种反应。 （上图为阳性反应。下图为阴性反应） 阅读结果 利用编码手册 或APILAB PLUS软件进出分析 根据说明书上，或彩图的指示，记录结果於报告单上。 五、血清学试验 用含已