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微生物论文 微生物及其代谢物快速检测技术的研究 摘 要 我们的日常生活与食品微生物密切相关，例如食品发酵、食品腐败、食品中毒属三个类群的微生物。食品微生物在许多食品的上产中起着至关重要的作用，其中细菌和真菌是导致食品腐败变质的主要元凶，食品中微生物的检测技术和自动化的发展，时刻影响着我们的生活。食品微生物检测技术很多，比较传统的方法是依靠培养基进行培养、分离及生化鉴定。随着科学技术的发展和科研水平的不断日高，微生物的快速检测技术越来越受到众多科研人员的青睐，成为科研的热点。 关键词：食品安全;微生物;快速检测技术 微生物快速检测法的国内外研究现状 微生物快速检测技术在在国内外成为愈来愈热的话题好人研究课题，目前国内外的快速检测方法主要有以下几种。 1.多聚酶链式反应PCR PCR技术是由Kleppe[3]等人在1971年首先提出的。该方法通过对人工难以培养的微生物相应DNA片段的扩增，检测扩增产物含量，从而快速地对食品中致病菌含量进行检测。检测时，首先在高温下(95℃)使得蛋白质变性，DNA双链变成单链；再迅速降温(55℃)，每条DNA单链退火，这就是所谓的热循环。之后温度重新上升到95℃，开始新的循环。经一套扩增循环(21到731次)将一个单分子DNA扩增到10分子。整个过程可以在1h内通过自动热量循环器完成。理论上，只要样品中含有一分子沙门氏菌的DNA，通过PCR技术完全可以在短时间内检测到。这种测定方法的优点是测定结果迅速，灵敏度和特异性高，检测成本低。 2.酶联免疫法ELISA 抗原—抗体反应法是测定特异性致病菌及其产生毒素最常用的方法。ELISA是利用抗原和抗体之间的反应，在临床医学领域的许多方面都有应用。抗体在抗血清中可以是单克隆抗体，也可以是多克隆抗体。这两种抗体在 ELISA技术中对于沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7、李斯特菌等血清型细菌有很好的检测效果。检测时首先将抗体吸附到固体载体上，然后再加富集培养物，使抗体将样品中所有目的抗原结合到固体载体上。实际中常使用一种夹心模式，在该模式中，先将第二个酶标抗体加入样品中，然后加入一种能与第二个酶标抗体发生阳性颜色反应的反应底物。如果样品中没有目的抗原，酶标抗体就无法结合，也就不会发生颜色反应，反之就可以认为该样品呈阳性。 3. 直接表面荧光滤膜计数技术(DEFT) 这是一种能迅速且直接测定样品中微生物负荷量的生物化学检测法。最初英国科学家是为了对牛奶样品进行检测而开发设计，目前该方法已经应用到乳制品、肉类制品、饮料、水和污水等物质的检测中。该项检测技术需要使用膜过滤技术和表面荧光显微镜，将样品进行预培养后，利用DEFT计数。该项技术能在24h内预测5℃和11℃下保存的巴氏杀菌乳的质量是否一致。每个样品的检测时间约25min，费用较低。 4.生物感应器biosensor 生物感应器，既可以辨认一个分子的信号，也可以辨认大量分子的信号。整个细胞都可以用作生物感应器。在应用微生物领域游乐广阔的发展前景，检测对象包括毒素(葡萄球菌肠毒素、海豚毒素、贝类毒素等)、特定的致病菌(例如沙门氏菌、葡萄球菌、大肠杆菌157:H7等)。其基本原理虽简单，但在实际应用中需要许多仪器共同完成。近几年来，人们普遍较为关注“生物芯片”和“微芯片”在食源性致病菌等微生物的检测。在设计生物芯片时，可以在芯片上加上不同种类的抗体或者DNA分子，以便在同一个芯片上同时完成对沙门氏菌、李斯特菌、大肠杆菌、葡萄球菌等的检测。据Heron报道(2000年)，生物芯片在本世纪中叶会有举足轻重的作用，其市场价值可达50亿美元之高[3] 。 新型快速检测技术的发展与研究 1.金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌生物学特征 金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属的一种，属于革兰氏阳性菌。直径为 0.8~1.5μm，金黄色葡萄球菌无鞭毛、芽胞，少部分有荚膜，不能运动。为需氧或兼性厌氧菌。最适宜的生长温度为 37℃，PH 值为 7.4。金黄色葡萄球菌具有高度的耐盐性，在高盐培养基中可以良好的生长。金黄色葡萄球菌还可以分解乳糖、麦芽糖、蔗糖、核糖、松二糖、甘露糖产酸不产气。其可以分解甘露醇，还可以产生溶血物质，因此在血平板上培养会产生溶血环。其产生的血浆凝固酶可以使血浆产生凝固，这也是金黄色葡萄球菌区别于其他葡萄球菌的的主要性质。还可以还原硝酸盐，产生脂酶和卵磷脂酶，因此在 Baird-Parker 培养基上培养的金黄色葡萄球菌可以在菌落周围产生沉淀环和透明圈。金黄色葡萄球菌在一般的营养物质中就可以良好的生长，但是只有当生长条件如营养成分、温度、水分活度、pH 等条件适宜的情况下才会产生肠毒素，而肠毒素的产生是导致食物中毒的原因。金黄色葡萄球菌抵抗外届不良环境的能力很强，在 80℃条件下加热达到 30min 才能