植物胚胎培养精品文档.ppt

几种植物胚乳培养的最佳时间(授粉后天数） 玉 米 8-12天 大 麦 10～12天 黄 瓜 7～16天 小黑麦 7～14天 * （3）培养条件： 常用培养基是MS和White，需要附加水解酪蛋白和酵母提取物。在诱导期一般需要高浓度的生长素、较高的pH，分化期需要较高浓度的细胞分裂素。 （4）胚因子： 胚对胚乳的培养有一定的影响，胚产生一些胚乳分化必需的成分。?? * 4．胚乳培养的形态发生 愈伤组织形成 最适发育时期的胚乳在离体培养条件下经过一定时间即可形成愈伤组织。 直接进行器官分化 * 胚乳培养过程 胚乳 胚状体发育成苗 不定芽苗 愈伤组织 形态发生 * 一、胚珠培养 定义：是指将胚珠从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。 * 胚珠培养类型： 1、受精胚珠的培养 2、未受精胚珠的培养 倒生胚珠 * （二）、培养基：White,Nitsch,MS （一）、胚珠培养的基本过程： 取材 灭菌 接种 * （三）、胚珠的发育： A 受精胚珠：一是形成种子；二是形成愈伤组织 B 未受精胚珠：形成单倍体植株。 * 胚珠培养的应用 1、受精胚珠培养目的： 一是打破种子的休眠； 二是挽救胚的发育，以获得杂交种。 2、未受精胚珠培养目的：获得单倍体植株。 * 离体授粉 离体授粉（pollination in vitro）是指将未授粉的胚珠或子房从母体上分离下来，进行无菌培养，并以一定的方法授以无菌花粉，使之在试管内实现受精的技术，又称为离体受精 一、离体授粉应用与意义 二、离体授粉的种类 二、离体授粉的技术（程序） 三、离体授粉中中影响结实的因素 * 2离体授粉的种类 根据无菌花粉授于离体雌蕊的位置，可将离体授粉分为 离体柱头授粉 离体子房授粉 离体胚珠授粉 * 离体授粉3种方式示意图 * 离体柱头授粉 离体柱头授粉是指通过雌蕊的离体培养，使无菌花粉授于柱头上，得到含有可育的种子和果实的技术。离体柱头授粉的方法通常是在花药尚未开裂时切取母本花蕾，消毒后，在无菌条件下用镊子剥去花瓣和雄蕊，保留萼片，将整个雌蕊接种于培养基上，当天或第二天在其柱头上授以无菌的父本花粉。离体柱头授粉是一种接近于自然授粉的试管受精技术，先后在烟草、金鱼草、玉米、小麦等植物上获得了成功。 * 离体子房授粉 通过人工方法将花粉直接引入子房，使花粉粒在子房腔内萌发，并进行正常受精，最后获得具有生活力的种子，这一技术又称为子房内授粉(intraovarian pollination)。把花粉直接送人子房，实现受精作用是克服受精前障碍的有效途径。 * 离体胚珠授粉 离体胚珠授粉是指离体培养未受精的胚珠，并在胚珠上授粉，最终在试管内结出正常种子的技术。离体胚珠授粉既可以将胎座上切下的单个胚珠(裸露胚珠)接种在培养基上，然后撒播花粉于胚珠表面，实现受精；也可以将带有完整胎座或部分胎座的胚珠接种在培养基上，并撒播花粉进行受精。 * 三、离体授粉的技术 （一）子房或胚珠的准备 ? 母本花蕾在开花前去雄套袋，开花后1~2天取下花蕾带回实验室备用。 ? 对取来的雌蕊材料必须先进行表面消毒，然后在无菌条件下剥离子房或胚珠。 ? 如授粉过程需要柱头，消毒时不要让消毒剂触及柱头。 （二）花粉准备 （三）离体授粉 （四） 授粉后胚珠（或子房）的培养 * （二）花粉准备 1、过程：扎(或套袋)花蕾?摘花蕾?表面消毒?剥花蕾取花药?无菌开裂 2、花粉灭菌方法 ?用新鲜花蕾浸渍灭菌，然后剥出花粉使用。 由于花粉粘连，撒播不均匀，因而影响撒播质量；若待花囊自行裂开后再用，又不能保证花粉具有高的萌发率和受精率。 ?紫外线照射灭菌，照射时间约15分钟。 注意在灭菌率、发芽率、受精率三者之间筛选出最适宜的照射时间。 * （三）离体授粉 1、材料灭菌彻底但又不要使其受到毒害。 2、处理后的子房或胚珠表面不要带有水珠，否则影响花粉萌发。 3、花粉可撒播于柱头、子房和胚珠表面。 4、柱头接近法。将花粉撒于本种植物的柱头上，切下柱头接种，然后在柱头周围接种异种裸露胚珠。 5、哺育法。将胚珠表面先蘸满有助于花粉发芽的培养基，然后在胚珠上撒播花粉使之受精。 6、增加撒播的花粉密度，有利于竞争性授粉。 * 四、离体授粉中中影响结实的因素 1、母体组织的影响 一般适当多保留母体组织有利于离体授粉。 2、胚珠的剥离时间 在开花后1-2天剥离的胚珠，比在开花当天剥离的胚珠结实率高。 3、培养基 所使用的培养基应利于： ? 花粉的萌发和花