谷氨酰胺通过一个Kras基因调控的代谢途径促进胰腺癌的生长培训资料.pptVIP

Fum：延胡索酸；Suc：琥珀酸；Cit：柠檬酸；Iso：异柠檬酸；Lac：乳酸 1、干扰GOT1导致Gln转化的Asp增加，苹果酸减少 * 1、磷酸戊糖途径分为两部分：氧化反应和基团转移反应，其意义在于产生磷酸核糖、NADPH、CO2； 2、Kras通过磷酸戊糖的非氧化途径增加糖代谢中间体但不能产生NADPH，说明PDAC细胞有维持氧化还原平衡的替代路径； * 1、抑制PPP途径的限速酶G6PD（葡萄糖-6-磷酸脱氢酶）对ROS水平无太大影响，缺糖对ROS影响也不大，推测GOT1调节的Asp转化成OAA的路径可能产生NADPH来维持氧化还原平衡； * 1、OAA能能部分缓解Gln缺乏所引起的ROS水平升高，也能缓解RNA干扰GOT1所引起的ROS水平升高； 2、GOT1抑制时苹果酸减少，怀疑OAA在ME1（苹果酸脱氢酶）的作用下代谢为苹果酸，同时产生NADPH； * 1、苹果酸能够缓解缺乏Gln和抑制GOT1引起的氧化应激反应 * 探究GOT1在Gln代谢中发挥的作用 4、GOT1对Gln代谢产物的影响 磷酸戊糖途径 4、该通路对Gln代谢氧化还原平衡的影响 DCFDA:荧光探针进行活性氧检测 G6PD（葡萄糖-6-磷酸脱氢酶） IDH1：异柠檬酸脱氢酶 各通路关键酶对ROS的影响 4、该通路对Gln代谢氧化还原平衡的影响 OAA——malate过程对ROS的影响 4、该通路对Gln代谢氧化还原平衡的影响 苹果酸对ROS的影响 4、该通路对Gln代谢氧化还原平衡的影响 Gln代谢通路模型 5、Asp生物合成的路径探索 Gln-Asp中关键酶确证 5、Asp生物合成的路径探索 验证该路径的其他部分是否为PDAC生长所必需 6、该通路在PDAC生长中的必须性 ASP， α-KG可以缓解PDAC缺乏Gln GLS和GOT1干扰时促进肿瘤生长 部分缓解Gln缺乏或GOT1干扰 GOT1存在 OAA 苹果酸 6、该通路在PDAC生长中的必须性 证明OAA或苹果酸是通过平衡氧化还原状态维持细胞增殖 6、该通路在PDAC生长中的必须性 体内实验：移植瘤 6、该通路在PDAC生长中的必须性 正常细胞的对照试验 6、该通路在PDAC生长中的必须性 Kras基因在Gln代谢中的作用mall developed by Gu GOT1和GLUD1转录水平 GOT1和GLUD1蛋白表达水平 对抑制剂的敏感性 Kras基因在Gln代谢中起重要作用 Kras 7、Kras基因的调控 Kras基因在Gln代谢中的作用 Kras干扰后，在转录和蛋白水平GOT1减少，GLUD1增加 PDAC细胞对AOA敏感，而EGCG无太大影响 Kras干扰后，细胞对AOA具有一定的抵抗力，对EGCG反而有一定的敏感性 7、Kras基因的调控 结论：该文章揭示了PDAC细胞代谢必须的一条路径，即Gln通过转氨酶GOT1和GOT2代谢，这些反应使细胞质的Asp转化成OAA，苹果酸，然后变成丙酮酸维持PDAC细胞生长，同时维持细胞氧化还原状态的平衡，而且此路径并不是正常细胞所必需的。 讨论： 1、GOT1在PDAC中是一条有别于正常细胞代谢的途径，可否探索其在肺癌中是否存在？ 2、在确证天冬氨酸转氨酶GOT1时，EGCG和AOA的给药剂量不同，是否为一个很可靠的对照？ 3、该文章对其研究通路的每一步反应时从代谢底物的分析循序渐进，步步论证，这种研究方法为我们提供一个思路。 4、本文中的Gln代谢通路通过维持癌细胞细胞氧化还原平衡促进癌细胞生长，我们的谷氨酰胺药物作用机制是否有打破癌细胞氧化还原平衡状态的作用？ 谢谢！ * 该文章称其发现了在胰导管癌细胞中一个肿瘤生长必须的路径，这个路径是Kras调控Gln代谢的新路径，PDAC依赖此路径获得生长所需营养以及维持其氧化还原平衡。 PDAC（pancreatic ductal adenocarcinoma）：胰导管癌 * * 1、该课题组之前的研究结论：葡萄糖是PDAC生长必须的； 2、PDAC细胞对Gln剥夺较敏感； 3、葡萄糖和Gln都是PDAC生长必须的。 Primary human PDAC lines were generated from ascites fluid under IRB approved protocols 02-240 and 2007P001918. low passage primary human PDAC cell lines (#1 and #2) * 1、Gln为TCA循环提供碳源，为核苷酸，非必须氨基酸（NEAA）、氨基己糖的生物合成提供N； 2、用RNA干扰的方法来验证Gln的代谢在PDAC的生长中起什么作用； 3、GFP：绿色荧光蛋白，对照 4、GLS：