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*/11 在线答疑：yanjie0001@126.com S54y@ 大 学 通 用 化 学 实 验 技 术 从猪血中提取SOD和凝血酶 实验140 从猪血中提取SOD和凝血酶 140.1实验目的 (1) 了解SOD和凝血酶的生理功能。 (2) 了解SOD和凝血酶的制备方法。 140.2 实验原理 超氧化物歧化酶（SOD）是一种金属酶，也是一种蛋白质，可在一定浓度的酸、碱、盐溶液中溶解，又可在一定浓度的有机溶剂中沉淀，可以利用这一特点，将SOD从血液中提取出来，然后用柱层析进行分离以获得纯净的SOD产品。凝血酶也是一种蛋白质，提取方法与SOD类似。 140.3 操作流程 （1）血球和血浆的分离 搅拌 离心 血浆 新鲜猪血 柠檬酸钠 血球 洗涤 搅拌 静置30min 沉淀物 静置24h 离心 上清液 血球 离心 （2）SOD的提取 0.9%氯化钠液 去离子水 搅拌 冷乙醇、丙酮 冷丙酮 搅拌 静置30min KH2PO4-K2HPO4 加热 冷却 恒温 离心 上清液 冷丙酮 静置30 min 离心 干燥 粗品SOD 预处理 洗脱 透析 上柱 超滤浓缩 树脂 （3）SOD的纯化 装柱 冷冻干燥 精品SOD 粗品SOD溶于KH2PO4-K2HPO4 KH2PO4-K2HPO4 称量 计算产率 溶解 溶解 静置 凝血酶原沉淀 凝血酶 血浆 （4）凝血酶的提取 离心 上清液 冷藏 蒸馏水 0.9% NaCl液 HAc调pH=5.3 CaCl2 离心 冷丙酮 离心 沉淀 冷丙酮 洗涤 冷藏 过滤 洗涤 干燥 凝血酶粗品 （5）凝血酶的纯化 溶解 过滤 浸泡 静置 清液 重复一次 0.9% NaCl液 HAc调pH=5.5 离心 冷丙酮 精凝血酶 沉淀 洗涤 过滤 干燥 凝血酶粗品 沉淀 滤液 140.4 注意事项 (1) 分离血球和血浆温度宜在15 ℃以下。 (2) SOD和凝血酶提取过程中应避免高温，以免酶失活。 140.5 问题讨论 (1) 在提取SOD和凝血酶时,欲使这2种酶分别从血球和血浆中分离出来,能否用三氯乙酸，苦味酸或CuSO4作为沉淀剂，为什么？ (2) SOD和凝血酶能否采用烘干法（105 ℃）进行干燥？最好采用何种干燥方法？ 140.6 参考答案 (1) 在提取SOD和凝血酶时,欲使这2种酶分别从血球和血浆中分离出来,能否用三氯乙酸，苦味酸或CuSO4作为沉淀剂，为什么？ 答：不能用三氯乙酸、苦味酸或硫酸铜作为沉淀剂，因为它们与蛋白质作用生成的是不可逆沉淀，改变了SOD和凝血酶结构，使之失去生理活性。 (2) SOD和凝血酶能否采用烘干法（105 ℃）进行干燥？最好采用何种干燥方法？ 答：均不能采用常规的烘干方法进行干燥，因为高温易使蛋白质变性而失去活性。最好是采用冷冻干燥或低温减压干燥法干燥。 */11 在线答疑：yanjie0001@126.com S54y@ 大 学 通 用 化 学 实 验 技 术 从猪血中提取SOD和凝血酶