吴永平-第5章-动物检疫技术.ppt

第五章 动物检验检疫技术 第一节 检验检疫样品 第二节 细菌分离及鉴定 第三节 病毒分离及鉴定 第四节 其他病毒微生物分离及鉴定 第五节 寄生虫检查 第六节 现代生物技术在动物检验检疫中的应用 第一节 检验检疫样品 一、病料采集和运送 1、在采取病料前必须对被检动物可能患有何种疫病作出初步诊断； 2、采取病料所用的容器、手术器械均应灭菌后才能使用，采样时应无菌操作； 3、解剖前检查（只有在确定不是炭疽后，方可剖解）； 4、取材时间要早（死后6h内）； 5、应根据不同的疫病相应的采取脏器或内容物；若无法估计是某种疫病，可全面的采取。（脓汁、血液、皮肤、骨头、脑、脊髓等） 二、病料的保存 （一）细菌检验材料的保存 脏器组织块→保存于饱和氯化钠溶液或30%甘油缓冲盐溶液中→容器加塞封固。 液体→装地封闭的毛细玻管或试管运送。 生前由直肠中采集的粪团→装入灭菌容器中寄送。 （二）病毒检验材料的保存 脏器组织块→保存于50%甘油缓冲盐溶液或鸡蛋生理盐水中→容器加塞封固。 （三）病理组织学检验材料的保存 脏器组织块→放入10%福尔马林溶液或95%酒精中固定，固定液用量应为病料的10倍。 三、病料的记录、包装和运送方法 （一）送检单 填写3份，一份存根，两份寄送检验室；待检查完毕后退回1份。 （二）病料的包装和运送 液体病料（如黏液、渗出液、尿及胆汁等）→装入细玻璃管中（管口用火焰封闭）→再用废纸或棉花包囊装入较大的试管中→再装入木盒中运送。 组织块或脏器 第二节 细菌分离及鉴定 细菌分离及鉴定是用人工的方法使细菌在适当的环境和营养基质中生长繁殖，获取纯种、进行鉴定与研究等。 为达到细菌分离及鉴定的目的，运用 无菌技术 提供适当的培养基 适宜的培养方法和条件 六、细菌的分离接种 平板划线接种法 斜面接种法 倾注培养法 穿刺培养法 半固体培养法 液体培养法 平板涂布培养法 七、细菌的培养方法 需氧培养法 二氧化碳培养法（CO2孵箱法、烛缸法、化学法） 厌氧培养法（厌氧罐培养法、培养箱法） 八、细菌的鉴定 （一）细菌的生长现象观察 细菌的一些培养特征 （二）、细菌基本形态及特殊结构的观察 细菌基本形态的观察 细菌基本形态：球状、杆状和螺旋状。 细菌基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质和核质。 细菌特殊结构：鞭毛、芽孢、荚膜等。 均需染色方可在显微镜下观察，染色方法有： 简单染色法：只用一种染料进行染色。 复杂染色法： 革兰氏染色法 抗酸染色法（抗酸菌呈红色，非抗酸菌呈蓝色） 瑞特氏染色法（细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色） 姬姆萨氏染色法（细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色） 细菌特殊形态的观察 （三）生化试验 细菌的生化试验是继形态学鉴定之后，又一重要鉴别依据。 糖类分解试验 吲哚（靛基质）试验 淀粉水解试验 V-P试验 甲基红（M.R）试验 柠檬酸盐利用试验 凝固血清紫牛乳试验 硫化氢试验 硝酸盐还原试验 尿素酶试验 （四）、细菌抗原检测及血清型鉴定 ◎ 细菌抗原结构比较复杂，有存在于细胞壁的菌体抗原（O抗原，有运动性的细菌在菌体抗原之外还有鞭毛抗原（H抗原），具有不同种、型特异性。 ◎ 血清型鉴定 首先要求鉴定的细菌必须纯净、新鲜，在适宜条件下培养，尽量减少伟代，以防发生变异。 其次有特异性强和效价高的已知标准血清（包括单克隆抗体）和标准菌株。 （五）、细菌遗传物质检测 目前比较成熟的遗传物质检测包括基因探针技术和PCR技术 （六）、细菌毒力测定 表示细菌毒力大小的单位有： 最小致死量（MLD）：能使特定的动物感染后，在一定时限内发生的最少活的细菌量或毒素量。 半致死量（LD50）：在一定的时限内能使半数实验动物感染后发生死亡所需的活的细菌或毒素量。 第三节 病毒分离及鉴定 检材的采集与送检、病料的处理 标本采取的原则： 1. 病毒标本的采取应尽早为好. 2.由于大多数病毒对热不稳定，应该立即接种，如果不能及时接种或需保存，一般置50％甘油盐水4℃或一20℃以下保存。 三、病毒的分离培养 一、动物接种培养 二、病毒的鸡胚培养 三、病毒的细胞培养 一、动物接种培养 动物接种是最原始的病毒培养方法。主要用于目前无法用细胞、鸡胚培养的病毒。 常用的动物有小白鼠、大白鼠、田鼠、豚鼠、 家兔，有时也用猴、猿、猩猩等。接种时要根据病毒对动物，组织细胞等嗜性不同而选 择特定的部位，如鼻腔、皮内、皮下、腹腔、脑内、静脉等。 小白鼠脑内接种法 【材料】 1.脑炎病毒（小白鼠脑脊髓炎）悬液：脑组织先用无菌生理盐水洗去血液，再加100％脱脂奶水研磨成10毫升悬液，离心沉淀30分钟，吸取上清液。 2.小白鼠：3周龄，体重6—8克。 【方