孙怡群-厌氧菌的实验室检查.ppt

厌氧菌的实验室检查 西京医院检验科细菌室 孙怡群 一、厌氧菌的分布和正常菌群 厌氧菌（ Anaerobes）是指一群在菌细胞代谢的呼吸链中不能以分子氧作为终末电子受体的细菌，它们以有机物或无机物作为终末电子受体，必须在低Eh，并含一定浓度CO2环境中才能生长的细菌，它们的能量只能来自酵解途径，这类细菌称为厌氧菌。 2.根据对氧的耐受性分类 （1）专性厌氧菌 一般以有机物为终末电子受体，只有在低氧分压（绝对无氧环境）、低氧化还原电势（Eh）中才能生长的细菌，它包括两大类： 绝对厌氧菌：（对氧极端敏感的厌氧菌EosA)只能在0.5%氧分压下生长或暴露在空气中10分钟左右立即死亡的细菌，如齿垢密螺旋体（T.denticola)，月形单胞菌（Selenomonas) 中等厌氧菌： 指能在2%-8%氧分压中生长，或暴露在空气中60-90分钟仍能存活的厌氧菌。临床上多见，如脆弱类杆菌（B.frgilis)、产气荚膜梭菌（C.perfringens)、普氏消化链球菌（P.prevola)以及双歧杆菌属中许多种都属于此类菌。 （2）微需氧菌 兼性厌氧菌 既能在有氧环境中又能在无氧环境中生长的细菌，即既能以分子氧作为终末电子受体，又能以有机物作为终末电子受体；既能通过氧化又能通过酵解途径获得能量的细菌。这类菌严格地说一般不属于厌氧菌的检验和研究范围。 类杆菌属新增4个菌种 纤维类杆菌（B.gracilis) 类杆菌属 梭杆菌属Fusobacter ium,新增加3个新种和3个亚种 龈沟梭杆菌（F.alocis) ③二氧化碳 嗜纤维菌属 新增二个菌种 有害月形单胞菌（S.noxia) ④月形单胞菌属新增加七个菌种 （二)革兰氏阳性无芽孢杆菌 1 .双歧杆菌 包括31个菌种24个亚种共55种 2.乳杆菌属 包括50个菌种7个亚种 新增加菌种 4. 放线菌属现 包括15个菌种 新增加3个菌种 （三）革兰氏阳性无芽孢 厌氧球菌 1.消化球菌属 只有黑色消化球菌一个种 （四）革兰 阳性芽孢杆菌— 梭状芽孢杆菌属 （Clostridium) 二、厌氧培养方法简介 一个成功的厌氧培养不仅分离培养时保持厌氧，而且在标本的采集、输送、培养基制备及接种等过程尽量要求厌氧操作，任何一个环节失误，都可能导致厌氧菌培养失败。 (一)主要厌氧培养方法 1）物理方法：阻断空气法、煮沸法、真空法、置换法、燃烧法、喷射换气法如转管法。 （二）主要反应 1.CO2和H2的 产生 三、厌氧菌的鉴定方法简介 2、厌氧菌感染的临床和 细菌学特征 （二）厌氧菌检验 4.厌氧菌鉴定的培养基选择原则 1）根据病变所在部位选择培养基种类 5.厌氧菌培养基及其组成 1）营养丰富的物质: 胰蛋白胨、植胨、水解蛋白、 动物肽链与蛋白、酵母膏（粉）、牛肉膏、 BHI、甚至血。 6. Finegold氏厌氧菌三级鉴定法 3 基因探针初步应用 药敏的主要方法 1.K-B纸片法 2.国际厌氧菌药敏标准方法——限量琼脂 稀释法 3.试管稀释法 4.微量稀释法 一、受试菌的准备 5.每次药敏试验受试菌中应注意加入标准菌株作为质控. ①B.fragilis脆弱类杆菌(ATCC 25285或NCTC 9343) 二、抗生素的稀释和准备 1.准确称取抗生素(我们一般称取2.56g,加DW或其它液体4ml)，以对倍稀释法稀释成系列浓度2560、1280、640、320、160、80、40、20、10、5、2.5。抗生素量的选择可据上表敏感范围作中点向上、向下各稀释5个浓度。 关于厌氧菌药敏的K-B（纸片法） 说明：厌氧菌的药敏试验一般不宜使 用K-B法做敏感试验，提倡使用试管或琼脂稀释法做药敏，有时为了临床需要也做K-B法, 提供临床参考。 方 法 1.纸片的制备：选用国产新华Ⅰ号滤纸， 使用打孔机制备成为6mm纸片。 谢 谢 ！ （一）临床常见疾病与厌氧菌感染 （二）厌氧菌检验 1.厌氧菌感染的病源学特点： 1）感染面与临床各科所在的部位有关，有的感染率可达100%，60%以上标本为混合感染。 2）混合感染现象： a 单种使用某种抗生素开始有效，很快无效。 b 病源涂片常只见肠球菌感染，并多易变性易改性。 3）检出率为57-78%，国内30-67% 4）继发性和慢性迁延性感染多见。 腹部及全身性感染与肠道菌群有关 头面部多来自口腔与呼吸道 1）感染局部病灶大量产气 2）分泌物有恶臭气味 4）粘膜破坏及感染口鼻消化道 3）分泌物带血或呈黑色