柴胡总皂苷的提取.doc

柴胡总皂苷的提取与柴胡中柴胡皂苷a, d 的含量测定 摘要:报道了大孔吸附层析分离提取柴胡总皂苷及采用高效液相色谱法测定柴胡中柴胡皂苷a, d 的含量的实验研究。 关键词:皂苷提取；柴胡皂苷；大孔吸附树脂； 柴胡皂苷a, d； 含量测定；高效液相色谱法 Extraction of saikosaponin and Determination of the content of saikosaponin a and saikosaponin d. Key words :saponin extraction ; saikosaponin ;macroporous absorbitive resins;saikosaponin a ; saikosaponin d ; determination of the content;HLPC Abstract :This paper reports the experiment of saikosaponin extraction using macroporous absorbitive resin and the use of the method of HLPC to determine the content of saikosaponin a and saikosaponin d. 柴胡在我国作为药用已有2000 多年的历史。我国药典规定北柴胡( B upleu rum Chi nese DC. )和狭叶柴胡(又称南柴胡, B . scorzonrif oleiumWilld. ) 为中药正品原植物。柴胡主要有效成分是柴胡皂苷,柴胡皂苷具有抗炎、保肝、降低血中胆固醇和调节内分泌等生理活性,这已被医药界广泛接受。目前已从柴胡及同属植物中分离并鉴定了50 余种柴胡皂苷,其中2 个糖基的柴胡皂苷a 、d 和b1 、b2 的含量较高,其结构式如图1 所示。国内外学者对柴胡的药理活性、柴胡挥发油成分及柴胡皂苷含量测定研究较多,但是有关柴胡皂苷提取工艺的报道很少。以北柴胡为实验材料,研究了大孔吸附树脂法提取分离柴胡皂苷以及利用高效液相色谱法测定柴胡皂苷a，d的含量。 　　　 　　 图1 　柴胡皂苷的化学结构式 　　　（一）1 　材料与方法 1. 1 　材　　料 北柴胡;柴胡皂苷标准品a 、b2; 薄层层析板;大孔吸附树脂AB-8 树脂D-280 树脂;高效液相色谱仪。 1. 2 　方　　法 1. 2. 1 柴胡总皂苷的提取 取一定量的北柴胡根部干粉,加入70 %乙醇浸泡3 d ,纱布、滤纸过滤后收集滤液,滤渣继续重复上述操作2 次,最后合并3 次所得的滤液。滤液减压浓缩至原体积的1/ 10 左右,石油醚3 次脱去脂溶性成分。水相挥去残留石油醚,加水稀释后上AB-8 大孔吸附树脂柱进一步分离提取。所得乙醇洗脱液经D-280 树脂柱脱色,减压浓缩后,冻干。 AB-8 树脂柱的使用流程:预处理好的AB-8树脂柱,样品液上柱,反复吸附直至薄层层析检测流出液中不再有皂苷为止,6～8 倍柱体积的去离子水洗脱糖,乙醇洗脱皂苷。 D-280 树脂柱的使用流程:预处理好的D-280树脂柱,待脱色样品液上柱,收集流出液(控制流速) ,75 %乙醇洗脱残留在树脂上的皂苷,合并流出液即为脱色后的样液。 1. 2. 2 AB-8 树脂柱洗脱液酒精度的确定 样品液加入预处理好的AB-8树脂柱,反复吸附去离子水脱糖后,依次 用10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、95 %不同酒精度的洗脱液洗脱皂苷,分别收集。从各梯度洗脱液中取样测总皂苷浓度。根据各酒精度洗脱液的柴胡总皂苷含量确定洗脱液的酒精度。 1. 2. 3 　柴胡皂苷含量测定 柴胡皂苷含量测定用香草醛闭塞法, 取样25μL也分别加入0. 8 %香草醛乙醇溶液0. 5 mL和77 %的硫酸5 mL ,摇匀,60 ℃水浴10 min ,再置于冰水浴中15 min ,然后也以香草醛和硫酸的混合溶液为空白,在544 nm 波长下测OD 值,最后根据测得的样液OD 值和标准溶液的OD 值,计算各酒精度洗脱液的柴胡总皂苷含量。 1.2. 4 　薄层层析法( TLC) 检测柴胡皂苷 将薄层层析板于110 ℃烘箱活化30～60 min ,用微量点样器吸取样品,点样于薄层层析板的点样线上。点样线一般距硅胶板底缘1. 5 cm 左右,点样次数由样品质量浓度来确定，每次点样均须用电吹风吹干。薄层层析板点好样后放人层析缸中展开，所用展开剂为V(氯仿)：V(甲醇)：V(水)=7：2．5：0．5，且所用展开剂的量不能没过薄层层析板的点样线。待展开至规定距离(一般距薄层层析板上缘0．5 cm)，取出，吹干溶剂，2％对二甲氨基苯甲醛。硫酸