第二章 工业微生物产生菌的分离筛选.pptVIP

微生物工程工业生产水平的三个决定要素: ;菌种分离与筛选工作程序; 调查研究（包括资料查阅）;第三次平板分离;分离与筛选的设计要求;;收集和筛选 的途径：;一、 含微生物样品的采集 二、 富集培养 三、 好氧微生物的分离 四、厌氧微生物的分离;一、 含微生物样品的采集 ;比较复杂，应根据分离目的来进行灵活掌握;土壤有机质含量和通气状况 ;土壤酸碱度和植被状况 ;地理条件 （南方北方土壤）;季节条件 ;2）采样方法;2、根据微生物生理特点采样;筛选高温酶产生菌通常从温泉、火山爆发处、堆肥等采样;杨尺蠖;赤松毛虫;侧柏毛虫;二、含微生物样品的富集培养;? 其要领是提供一些有利于所需菌株生长或不利于其他菌型生长的条件，例如，供给特殊的基质或加入某些抑制剂。;1、控制培养基的营养成分; 富集培养时，还需根据微生物的不同种类选用相应的富集培养基，如淀粉琼脂培养基通常用于丝状真菌的增殖，配方为（%）：可溶性淀粉4，酵母浸膏0.5，琼脂2，pH6.5～7.0。;2、控制培养条件：pH、温度及通气;3、抑制不需要的菌类; 分离厌氧菌时，可加入少量硫乙醇酸钠作为还原剂，它能使培养基氧化还原电势下降，造成缺氧环境，有利于厌氧菌的生长繁殖。 筛选霉菌时，可在培养基中加入四环素等抗生素抑制细菌，使霉菌在样品的比例提高，从中便于分离到所需的菌株;三、好气微生物的分离;1、稀释涂布法和划线分离法;2）.平板划线分离法 ;2、利用固体平板的生化反应进行分离;1）、透明圈法;例如用此法分离产生碱性蛋白酶的芽孢杆菌;? 分离某种产生有机酸的菌株时，也通常采用透明圈法初筛 ? 在选择培养基中加入碳酸钙，使平板呈混浊状，产酸菌能够把菌落周围的碳酸钙水解，形成清晰的透明圈;透明圈的大小不能完全作为选择高产菌的依据，因为在深层培养中的产酶单位与平板上圈的大小之间并不完全成正比。 ? 但作为初筛的手段是有意义的;2）、变色圈法;;内肽酶产生菌的分离筛选：酪蛋白作底物平板产生透明圈进行鉴别 ，吲羟乙酸酯为底物加到分离培养基中，产生蛋白酶的菌落由于水解吲羟乙酸酯为3-羟基吲哚，后者能氧化生成蓝色产物，??据呈色圈便可选出平板上产蛋白酶的菌落。 分离乳糖酶产生菌 产乙醇菌株的分离筛选:糖为碳源,覆盖一层含有盐类的琼脂，蓝色物质在醇脱氢酶和NAD作用下,电子脱色。生成乙醇的菌落便显出一个淡白色的圈。;3）、生长圈法; 只要是筛选微生物所需营养物的产生菌时，都可采用生长圈法，工具菌用 相应的营养缺陷型菌株，由于得到所需营养，凡是目的微生物周围便会出现混浊的生长圈。 ;4）、抑菌圈法;在青霉素菌种选育中，还可利用加入青霉素酶来筛选青霉素高产菌株，做法如下：将产黄青霉孢子进行诱变处理，致死率约为99％。分离于琼脂平板上，控制孢子浓度，使长成独立菌落，一直培养到青霉素产量达到顶峰，加入0.106U/mol青霉素酶于鉴定菌枯草芽孢杆菌悬浮液中，铺张于菌落平板表面，凝固后，培养17～20h。测量抑菌圈大小，根据有效指标（抑菌圈直径于菌落直径之比）选出高产突变株。 ;检验菌;从土壤到海洋;3、组织分离法;1）、对一般有病组织的分离方法 ;2）、食用菌孢子分离法;4、随机分离方法;5、通过控制培养和培养条件进行分离 ;1）培养基的营养成分 ;2）培养基的pH;3）排除不需要的菌类 ;4）控制培养温度;6、一些生物活性物质产生菌的分离 ;抑菌圈法、扩散法、生物自显影法等;? 临床上有效的抗肿瘤药物大多是直接作用于核酸或抑制核酸生物合成的物质 ? 大部分具有抗菌或抗真菌的活性 ? 现发展出利用微生物筛选作用于DNA 的抗肿瘤药物的方法，如生化诱导分析法;生化诱导分析法（Biological induction analysis; BIA）;3、酶抑制剂产生菌的分离;4、生长因子产生菌的分离;四、厌气微生物的分离;1、加还原剂法;2、焦性没食子酸法 ;3、平皿厌气培养法 ;4.试管厌气培养法;5、生物吸氧法;举例：红螺菌的分离 ;举例：反硝化细菌的分离 ;五、野生型菌株的筛选和鉴定 ;六、极端环境微生物的分离筛选;选育方法：;作业