人教版高中生物选修1专题二　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（课件 共29张PPT).ppt

今天我们来学习如何分离以尿素为氮源的微生物。 * 原因：因为热泉温度70～80 ℃，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。 * 请你分析该培养基的配方，想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？ * 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ * 讲完后讲P23楷体字部分 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 应在火焰旁称取土壤10g。 在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在火焰旁进行 * 牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用; 选择较为宽泛的稀释范围，稀释倍数为103-107; 每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基，共需要15个选择培养基，5个牛肉膏蛋白胨培养基； 准备8个灭菌试管和1个灭菌移液管。 * 使结果更准确 课题2：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 导入新课 上一节课我们已经学习了培养基的配制以及接种技术，现在我们就来学习如何从土壤中将我们需要的微生物进行分离。 土壤 微生物 尿素是一种重要的农业氮肥，分子式为H2NCONH2，不能直接被农作物吸收。 土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 原因: 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2)2+H2O 脲酶 CO2+2NH3 一、研究思路 二、实验设计 三、结果分析与评价 四、课题延伸 你能想一想怎样能将分解尿素的细菌从土壤中分离出来吗？ 想一想 （一）筛选菌株 耐热微生物 温泉 耐寒微生物 冰川 分解石油的细菌 油田 筛选原则： 根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 实例：Taq DNA聚合酶的发现 DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术。此项技术的自动化，要求使用耐高温的DNA聚合酶，该去哪里寻找？ 科学家是从水生耐热细菌 Taq中分离到耐高温的Taq DNA聚合酶的。 2、选择培养基 定义 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培养基。 选择培养基配方 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H20 0.2g 琼脂 15.0g 蒸馏水 1000ml 在左图的培养基配方中，碳源和氮源分别是什么？ 碳源——葡萄糖、 尿素 氮源——尿素 1、显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 不能区分死菌与活菌； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 缺点 （二）统计菌落的数目 2、稀释涂布平板法（活菌计数法） 原理： 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 恰当的稀释度是成功统计菌落数目的关键。 样品稀释培养示意图 ①选 30～300 个菌落的平板统计。 ②每个稀释度取3个平板取其平均值。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 （三）设置对照： （1）设置对照的目的： （2）对照实验： 指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。 实验组： 对照组：设置对照 ---- 同等条件下，培养空白培养基。 菌落计数 配制土壤溶液 系列稀释 涂布平板与培养 实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。 原因： ⑴土样不同， ⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质) 小结： 通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 结果预测： 如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 菌落计数 配制土壤溶液 系列稀释 涂布平板与培养 土壤中细菌分离与计数示意图 实验具体操作步骤： 1、土壤取样 从富含有机物、潮湿、酸碱度适中的土壤中取样。铲去表层土3c