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中国科学院上海实验动物中心 * 转基因荧光兔 转基因荧光鱼 * （Chan AWS, et al. Science 2001; 291:309-312）绿色荧光蛋白（GFP）基因猴的组织被证明含有绿色荧光蛋白质的转基因表达，“安迪” 于２０００年１０月２日诞生 * “安迪”与其妈妈 * * 五、转基因动物的应用： （一）生命现象的基础理论研究： 1、发育生物学研究： 通过了解基因的表达、关闭和调控，了解调控顺序。 2、遗传学研究 观察导入的突变基因的表达，了解基因结构与功能的关系，还可用于基因组印迹分析、遗传缺陷的矫正等. * （二）医学研究： 1、心血管疾病研究： 将转脂蛋白和转纤维蛋白溶酶原等作为外源DNA转入动物体内，建立心血管疾病转基因动物模型。 2、肿瘤学研究： 肿瘤基因—— 肿瘤转基因动物模型。 * 3、遗传病研究： 导入遗传疾病外源基因，制作遗 传疾病转基因动物模型；导入正常基 因，弥补基因缺陷所致遗传疾病。 4、免疫学研究： 用转基因HBsAG小鼠模型研究免疫 耐受性的问题。 * （三）改良和培育动物新品种： 使用重组DNA的转基因技术，培育 出生长快、产肉、产毛、产奶更多而耗 料极少的转基因家畜。 （四）研制和生产生物活性物质： 将具有医学价值的生物活性物质 （如组织型纤溶蛋白元激活因子，tPA）导入家畜或家禽的受精卵，从转基因动物的体液如乳汁、血液、尿液、腹水中收获基因产物。 * 图中上侧为转基因鱼 * 北京华大 台湾 * * 中国农业大学、西北农业科技大学等单位成功地培育出体细胞克隆牛 * 我国首批转基因克隆牛的再克隆体在梁山降生，共出生五头，存活三头，分别取名为福欢娃、福迎娃和福圣娃 * 六、转基因疾病动物模型与基因治疗  动物模型 （一）转基因疾病动物模型： 1、病毒性疾病模型： （1）小儿麻痹病毒受体转基因小鼠 （2）乙型肝炎病毒携带者模型 （3）乙型肝炎表面抗原转基因动物 模型 2、肿瘤转基因动物模型 * 3、代谢疾病转基因动物模型 （1）高歇氏病转基因动物模型 （2）家族性神经多发性淀粉样变（FAP）转基因小鼠 （二）基因治疗的动物模型： 将外源生长激素基因导入“侏儒 症”小鼠——个头增大3倍，恢复生育 能力。 * 左侧为转移了大鼠生长激素基因的小鼠 1982年，Richard Palmiter 和 Ralph Brinster 领导的一个小组将一个能够被锌调控的DNA元件与大鼠的生长激素基因连在一起，并将其注射到了受精了的小鼠胚胎中，从而培育出了世界上第一批转基因小鼠。这些转基因小鼠长期取食含有足量锌的食物后，就会长得非常大。转基因小鼠的出现掀起了遗传学研究的新的浪潮。 * 基因敲除动物 一、概述 是指对一个结构已知但功能未知的基因，从分子水平上设计实验，将该基因去除（knock out），或用其它顺序相近基因取代，然后从整体观察实验动物，推测相应基因的功能。 * 1987年，Martin Evans，Oliver Smithies 和 Mario Capecch 领导的几个研究小组对胚胎干细胞中特定目 标基因进行失活，培育出了第一只基因敲除小鼠。这 三位科学家因为这项工作在2001获得了Lasker奖。接 下来，科学家们用同样的技术又培育出了几千只基因 敲除小鼠。 * 基因敲除动物的建立 在体外先构建一个打靶载体，这个载体上含有一段与欲敲除的基因具有高度同源性外源基因，在外源基因中插入一带有启动子的选择标记基因，把这个含有修饰后外源基因的载体利用转染的方法导入ES细胞中，这样导入细胞中的外源基因就有机会与染色体上的靶基因发生同源重组，把修饰的外源基因置换到ES细胞中，通过筛选标记基因而检出发生同源重组的ES细胞并在体外扩增，将此ES细胞注入供体囊胚，再将带有此ES细胞的囊胚胎移植到假孕鼠的子宫内，发育成一个嵌合体，经过进一步杂交传代的方法，使外源基因纯合，即建立成基因敲除动物。 * 第三节 克隆动物 一、克隆动物的概念 cloning animal —— 动物通过体细胞进行的无性生殖（也称无性繁殖）以及由无性生殖形成的基因型几乎完全相同的后代个体组成的群体。 世界卫生组织在关于克隆的非正式声明中定义为： 遗传上同一的机体或细胞系（株）的无性生殖。 二、动物克隆技术的基本方法 （一）胚胎分割 （二）细胞核移植： 1.胚胎细胞核移植 2.胚胎干细胞核移植