质粒DNA的提取及酶切鉴实验定.docVIP

质粒DNA的提取及酶切鉴定 一、实验目的 掌握质粒的小量快速提取法；了解质粒酶切鉴定原理。 二、实验原理 质粒（ plasmid ）是一种染色体外的稳定遗传因子。大小在 1~200kb 之间，具有双链闭合环状结构的 DNA 分子。主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。质粒具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。他可独立游 离在细胞质内，也可整合到细菌染色体中，它离开宿主的细胞就不能存活，而它控制的许多生物学功能却赋予宿主细胞的某些表型。 所有分离质粒 DNA 的方法都包括 3 个基本步骤：培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细菌；分离和纯化质粒 DNA 。采用溶菌酶可破坏菌体细胞壁，十二烷基磺酸钠（ Sodium dodecyl sulfate, SDS ）可使细胞壁裂解，经溶菌酶和阴离子去污剂（ SDS ）处理后，细菌 DNA 缠绕附着在细胞壁碎片上，离心时易被沉淀出来，而质粒 DNA 则留在上清液中。用酒精沉淀洗涤，可得到质粒 DNA 。 质粒 DNA 分子量一般在 10 6 ∽ 10 7 道尔顿范围内。在细胞内，共价闭环 DNA （ covalently closed circular DNA ，简称 cccDNA ）常以超螺旋形式存在。若两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消除链的张力，这种松弛型的分子叫作开环