第九章分子荧光光谱法molecular-fluorescence-spectroscopy.pdfVIP

第四章§4 荧光光谱 Molecular fluorescence spectroscopy 光致发光和分子荧光光谱法 荧光光谱法基本原理 荧光分析仪器和荧光法的应用 光致发光（Photoluminescence ）: 荧光和磷光是分子吸收光成为激发态分子，在返回基态 时的发光现象，称为光致发光。 特点： ★灵敏度高，检测限比吸收光谱法低1~3个数量级； ★线性范围宽； ★选择性比吸收光谱法好，因为能产生紫外可见吸收的分子 不一定发射荧光或磷光； ★应用范围不如吸收光谱法广，因为有的分子不发荧光。 基于化合物的荧光测量分析方法称为分子荧光光谱法。 一、荧光光谱法基本原理 分子的激发与失活 1. 分子的多重态 单重态 一个所有电子自旋都配对 的分子的电子状态。大多数有机 物分子的基态是单重态。当基态 一对电子中的一个被激发到较高 能级，其自旋方向不会立刻改 变，分子仍处于单重态。 三重态 有两个电子的自旋不配对 而平行的状态。激发三重态能量 较激发单重态低。 2. 激发态分子的失活: 激发态分子不稳定，它要以辐射 或无辐射跃迁的方式回到基态。 / λ1 λ2 λ2 λ3 λ4 无辐射跃迁: (1) 振动弛豫：激发态分子由同一电子能级中的较高振动能 级转至较低振动能级的过程，其效率较高。 (2) 内转换：相同多重态的两个电子能级间，电子由高能级 回到低能级的分子内过程。 (3) 系间窜越： 激发态分子的电子自旋发生倒转而使分子的 多重态发生变化的过程。 (3) 外转换：激发态分子与溶剂或其它溶质相互作用、能量 转换而使荧光 （或磷光）减弱甚至消失的过程。荧光强度的 减弱或消失，称为荧光熄灭（或猝灭）。 辐射跃迁: 荧光：受光激发的分子从第一激发单重态的最低振 动能级回到基态所发出的辐射。寿命为10-8 ~ 10 -11s 。 由于是相同多重态之间的跃迁，几率较大，速度 6 9 -1 大，速率常数kf为10 ~10 s 。 磷光： 从第一激发三重态的最低振动能级回到基态 所发出的辐射。由于磷光的产生伴随自旋多重态的 改变，辐射速度远小于荧光，磷光寿命为10-4 ~10s 。 辐射能量传递过程 荧光发射：电子由第一激发单重态的最低振动能级→基态(多 / 为 S1→S0跃迁) ，发射波长为λ 的荧光；10-7～10-9 s 。 2 由图可见，发射荧光的能量比分子吸收的能量小，波长更 / 长： λ λ λ ； 2 2 1 磷光发射：电子由第一激发三重态的最低振动能级→基态 （T1 →S0跃迁）； 电子由S0进入T1的可能过程：（S0 → T1为禁阻跃迁） S0 →激发→振动弛豫→内转移→系间跨越→振动弛豫→ T1 发光速度很慢： 10-4～10 s 。 光照停止后，可持续一段时间。 二、激发光谱与荧光(磷光)光谱 1.荧光(磷光) 激发的光谱曲线 固定测量波长(选最大发射波长),凝聚态物质发射的荧光 (磷光)强度与照射光波长的关系曲线 （图中曲线Ⅰ） 。 激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，荧光 强度最大； 2.荧光光谱(或磷光)光谱 固定激发光波长(选最大激发波长),凝聚态物质发射的荧 光(或磷光)强度与发射光波长关系曲线( 图中曲线Ⅱ 或 Ⅲ) 。 荧光发射光谱 磷光光谱 荧光激发光谱 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 200 260 320 380 440 500 560 620 室温下菲