遗传基因保鲜知识讲稿.pptVIP

遗传基因保鲜;1979年，Adams和Yang(1979)阐明了乙烯合成的主要途径，其主要步骤为 ： ;乙烯合成途径中关键酶的研究; ACS由多基因家族编码，不同因子可诱导该家族中不同成员表达，不同来源或同一来源的基因家族不同成员在序列上均存在8个保守区。 ACS专一性的以AdoMet为底物，以磷酸吡哆醛(PLP)作为辅基，AVG和AOA是ACS的竞争性抑制剂。 （AVG — 氨基乙氧基乙烯基甘氨酸；AOA — 氨基氧乙酸） ACS可以被外源乙烯诱导产生。;Oeller et a1．(1991)利用番茄中克隆到的ACC合成酶基因(L-ACC2)，反向插入到CaMV35S启动子和NOS终止子之间，再与 pBI101相连，转化番茄子叶并获得转基因植株。由于转基因植株中反义RNA的作用，果实成熟中乙烯所诱导的ACC合成酶基因的表达受抑制，阻止了其mRNA的积累，因而ACC合成酶的数量减少。在转基因植株果实中乙烯的合成量较非转基因果实降低了99%，几乎完全抑制了乙烯的合成，并且成熟时间推迟30-90天。 转基因果实也可以用乙烯、丙烯或乙烯类似物进行催熟，催熟的果实与自然成熟的果实在质地、颜色、芳香气味和压缩性等方面无明显区别。 ;Savin et a1.(1995)把反义ACC基因转入康乃馨中，转化植株没有明显的乙烯呼吸峰，并且可以延迟花瓣衰老，在采收后很少或几乎没有ACS mRNA的存在。 Kiss et a1．(2000)利用反义RNA技术把反向的ACC合成酶基因通过EHA105和LBA4404．转入到康乃馨中，然后用Kan抗性筛选，此后对初筛的小苗首先通过NPTII的特异引物进行PCR检测，然后做NPTII的Southern杂交以及RT-PCR检测，证实外源基因已转入康乃馨中，待转化植株开花时测定乙烯的释放情况、花瓣衰老快慢、插花寿命长短等，发现乙烯明显减少，并推迟花瓣衰老，延长瓶插寿命。;（2）ACC氧化酶(ACO);（3） ACC脱氨酶(ACDS)基因 自1978年Honma Shimomura发现ACC脱氨酶以来，已先后在多种土壤微生物(如细菌、真菌和酵母)中发现该酶的存在(Sheehy et a1.，199l；Jacobson et a1.，1994；卫军等，1994；Campbell et a1.，1996；Shah et a1.，1998)，但目前尚未在植物中发现ACC脱氨酶。该酶最早是从土壤细菌Pseudomonas sp．中分离出来的一种可以将ACC分解成α-丁酮酸和氨的酶(Honma et a1.，1978；Penrose et a1.，2001)。;目前ACC脱氨酶已在部分微生物中得到了分离和纯化，其生化特性也己基本明确，其中大部分是从该酶结构上分析所得，特别是通过对酵母中该酶的晶体结构分析获得。 Grichko et a1.(2000)对来自阴沟肠杆菌(Enterobacter-cloacae UW4)ACC脱氨酶基因的序列分析表明，该基因上游含有在转录过程中起调控作用的几个特征：半个CRP(cAMP receptor protein)结合位点、一个FNR(fumarate-nitrate reduction)调控蛋白结合位点、一个LRP(1eucine responsive regulatory protein)结合位点和一个类似LRP蛋白的编码区。;Li et a1.(200la；2002b)从阴沟肠杆菌(Enterobacter-cloacae UW4)中分离克隆出ACC脱氨酶基因，该DNA片段含有一个开放阅读框，具有696个碱基，编码232个氨基酸，属于酰胺水解酶家族一员，该基因编码的蛋白质同一般的以吡哆醛磷酸盐为辅助因子的ACC脱氨酶相比具有单核或双核金属中心。 在对已知的ACC脱氨酶作系统树分析后，发现源自细菌的ACC脱氨酶同源性很高；源白酵母的ACC脱氨酶与细菌来源的ACC脱氨酶同源性要高于真菌的ACC脱氨酶。但也有报道发现，来自不同细菌的ACC脱氨酶其同源性很差或根本就无同源性。至今对该酶的作用机理尚待于进一步研究。;目前已克隆了多种土壤微生物中ACC脱氨酶基因，其中一些基因可在细菌和植物中较好地表达。Klee et a1.(1991)将该酶基因正向导入番茄中得到转基因植株，乙烯的生物合成被抑制达97％，而且对其营养生长及表型也无影响；但其果实成熟比对照明显推迟(至少6周)。该酶的转基因番茄株系(5673)其果实在成熟期脱离母体后，成熟明显比对照推迟；相反，留在母体上的果实成熟相对要早，而且比对照果实成熟稍迟。进一步的研究发现留在母体上果实的内源乙烯含量高于脱离母体的果实(Klee et a1.，1993)。 Sheehy et a1.(1993)用CaMV 35S启动