细菌计数生长筛选诱变第三节.ppt

* 目前发现自然状态下许多其它细菌、放线菌、真菌和高等动植物中都也有转化现象。 * Ⅱ.接合 （合作） Ⅲ.转导（间谍窃取） 噬菌体－细菌病毒 通过噬菌体的携带而转移导入的基因重组现象称为转导。 转导是1951年辛德尔(Zinder)和莱德贝尔格(1Jederberg)在研究鼠沙门氏伤寒杆菌重组时发现的。 细菌有性生殖 * B.人工基因重组—遗传工程 遗传工程是70年代初发展起来的生物技术。 定义：对遗传物质进行改造（人工干预下的杂交、转化、接合、转导）的技术。 工程：类似工程设计那样有很高的预见性、精确性与严密性。 * 遗传工程的方法 遗传工程方法包括两个水平的研究：一种是细胞水平；另一种是基因水平。所以，又可把它分为细胞工程和基因工程。 细胞工程——两个细胞原生质体融合 体 外 切 割 导 入 遗 传 物 质 基 因 片 段 受 体 细 胞 基因工程——两个细胞DNA片段剪接拼接 狭义的讲，遗传工程就是基因工程。 原理：限制性核酸内切酶 * 在特殊培养基上（如含有青霉素）筛选目的细菌 质粒载体（具有抗性基因） 如抵抗青霉素 长出必然是重组成功的细菌 外源基因片段 * 例如：降解石油的工程细菌 70年代美国生物学家查克捡巴蒂(Chakrabarty)针对海洋输油，造成浮油污染，影响海洋生态等问题进行了研究。石油成分复杂，是由饱和、不饱和、直链、支链、芳香……烃类组成，不溶于水。而海水含盐量高，虽发现90多种微生物有不同程度降解烃类的能力，但不一定能在海水中大量繁殖生存，而且降解速率也较馒，查氏将能降解脂(含质粒A)的一种假单胞菌作受体细菌，分别将能降解芳烃(质粒B)、芳烃(质粒C)和多环芳烃(质粒D)的质粒，用遗传工程方法人工转入受体细菌，获得多质粒“超级细菌”，可除去原油中2／3的烃。浮油在一般条件下降解需一年以上时间，用“超级细菌”只需几小时即可把浮油去除，速度快效率高。见下图。 * 基因工程方法看似简单，但在具体实施上有较大的难度。A.细菌的质粒本身容易丢失或转移 B.质粒具有不相容性 （只有在一定条件下，属于不同的不相容种群的质粒才能稳定地共存于同一宿主中。） * 三、原生质体融合 通过人为方法,使遗传性状不同的两个 细胞的原生质体融合,继而遗传重组,借 以获得兼有双亲性状,遗传性稳定的融 合子的过程。 * ●主要步骤： 1）选择亲本 2）制备原生质体 3）原生质体融合 4）原生质体再生 5）筛选 * 四、菌种保藏 ●菌种衰退现象：形态、生长速度、代谢产物、致病性、抗逆性等 ●复壮：通过分离纯化和测定，从衰 退群体中筛选未退化的个体。 * 菌种衰退的防止： 1）减少传代次数 2）良好培养条件 3）利用不易衰退 的细胞传代 4）菌种的有效保藏 * 保藏条件： 低温、干燥、无氧、低营养、保护剂 * 工业上常用的菌种保藏方法 1、斜面冰箱保藏法 2、沙土管保藏法 3、石蜡油封保藏法 4、甘油悬液保藏法 5、真空干燥冷冻保藏法 6、液氮超低温保藏法 * ●常用保藏方法比较： * 思考题 1、分离微生物主要包括哪几个步骤？如何能够分离得到高产纤维素酶的菌株？ 2、菌种诱变有哪些方法？查找文献，确定利用紫外线诱变的基本步骤。 3、原生质体融合的基本原理是什么？有什么优点？主要的步骤有哪些？ 4、菌种保藏的基本原理是什么？有哪些基本的保藏方法？ * * * * * * 第二章 工业微生物基础 * 第三节 微生物菌种的分离选育和保藏 微生物菌种是工业发酵生产的基本条件。 发酵的产量、发酵原料的利用率、生产周期等均与菌种有关。 * 细菌生长（数量）测定方法 借助显微镜观察测定 优点：快速 提问:有哪些缺点? 缺点：不能区分细菌的死活 另外主要的一种就是平板培养计数。 基础知识 * 1.涂片染色法 1视野菌液(ml)＝(0.01ml ／1cm2)*视野面积(cm2) * 2.计数器(血球计数板）测定法 0.052cm2×25 0.1ml菌液 * 提问：数了125个小格中有90个细菌，样品中的细菌浓度是多少？ (90个÷125) * 400 / 0.1ml =2880个/ml 适用范围：测定个体较大的细菌或原生动物 细菌个体若太小、过多，由于每一小格中细菌层层叠加，相互遮挡，难以准确计数。 数数细菌（或其他微生物或细胞）数目，（一般数125个小格），折算样品细菌浓度； * 3.比例计数法 比例——样品菌液与等体积的血液混合，观测二者比例 提问：如果平均每个视野中细菌数量/