1. 项目承担单位在所申报项目相关研究方面的工作基础和取得....docVIP

1. 项目承担单位在所申报项目相关研究方面的工作基础和取得的主要研究成果。　　 　　 本研究组最早在国内系统研究黄杨科的生物碱成分，发现30多个新结构，但没有注意到其细胞毒活性。　 申请者在日本进行博士后合作研究期间，从云南药用植物金丝矮陀陀（Pachysandra axillaris）一个生物碱混合物部位，从中分离得到了化合物1（Pachysanonin）：3-dimethylamino-11α-(3,4-dimethyl-penta-3(4)-enoxy)-12β- acetoxy-pregnan- 20-one (1)；化合物2（Pachysanone）：1α-(3,4- dimethyl- penta-3(4)- enoxy)-12β-acetoxy-pregnan-3, 20-dione (2)。这两个新型孕甾烷衍生物，其结构特点是C-11，12上氧化并成酯。其中C-11上的酯基是由天然产物中比较少见的3，4-二甲基-3（4）-烯-戊酸形成，利用X-Ray单晶衍射实验确证了结构。　　　 　　 　　　 　 　 　 　　 在确定化合物结构的基础上，进行了这个化合物对路易斯氏肺癌细胞的细胞毒活性实验。实验发现：化合物2对路易斯氏肺癌细胞株具有显著的抑制活性，IC50为0.02μg/ml，而再著名抗癌活性天然产物三尖杉碱（Harringtonine）、高三尖杉碱（Homoharringtonine）、阳性对照物Adriamycin同时做平行试验，其结果如表1所示。结果表明：化合物2的活性强于阳性对照物Adriamycin、高三尖杉碱（Homoharringtonine），而与三尖杉碱（Harringtonine）相当。这些化合物申请了发明专利，并得到了授权。　　　 表1 Pachysanonin (1)、Pachysanone（2）对Lewis Lung Carcinoma肿瘤细胞的抑制活性　　　 　　 化合物　　　 IC50 (μg/ml)　 Pachysanonin (1)　　　 Pachysanone (2)　 Harringtonine　　 Homoharringtonine　　 Adriamycin (positive control)　 2.1　 0.02　 0.02　　　 0.15　　　 0.06　　 　　 最近为了解全球气候变化对次生代谢产物结构产生的影响，再次研究黄杨生物碱时，发现这类成分对两个肿瘤细胞系HepG2、K562活性敏感。本研究组最近从小叶黄杨地上部分得到的两个生物碱BM-3，BM-8细胞毒活性显著：BM-8对肿瘤细胞系HepG2、K562的IC50分别达0.78，0.37μM；BM-3对HepG2、K562细胞系的IC50也分别达0.89和4.44 μM，而同实验中阳性对照DDP IC50分别为1.45，8.54Μm）（已申请国家发明专利）[22]，表明黄杨生物碱具有限制的细胞毒活性和高度的选择性，是一类很好的抗白血病、肝癌肿瘤的潜在天然药物，值得深入进行黄杨生物碱化学成分的抗肿瘤作用及其构效关系研究。　　　 　 　 　　 　　 　 BM-3 BM-8 　　 　　　 对p53信号通路的作用也十分有特色：BM-8对两种细胞株有较好的细胞毒活性，昆明理工大学罗瑛教授研究组对BM-8进行了作用机理的初步探讨，发现BM-8显示出针对含突变p53的肿瘤细胞具有特异性细胞杀伤作用。而对无突变p53的肿瘤细胞有生长抑制作用。实验结果如下图所示：　　 　 No.　　 p53-/-+S+Ras　　 p53-/-+v+Ras　 DMSO　　 　 　　 1　 　 　　 2　　 　　 　　　 3　　　 　　 　　　 4　 　　　 　　 BM-8对p53-/-+S+Ras、p53-/-+v+Ras肿瘤细胞的抑制作用是有其特色的，其高度活性选择性，表明黄杨生物碱可能是一类新型的潜在抗肿瘤先导结构，也可能发现新型的抗肿瘤药物，因而深入研究黄杨科生物碱的抗肿瘤构效关系是十分必要的。　 目前已有的主要基础有：　　 Ming-Hua Qiu, Norio Nakamura Byung-Sun Min, Masao Hattori,Chemistry Biodiversity, 2005, 2(7): 866-871　 邱明华, 闵炳善，中村宪夫，服部征雄；一种孕甾二酮化合物，其制备方法和应用, 专利号：Z1（已授权）　 Yu-Xin Yan, Xiao-Dong Hu, Jian-Chao Chen, Yun Sun, Xian-Min Zhang, Chen Qing,