微囊藻毒素LR阻抗型免疫电化学检测方法的研究.pdfVIP

摘要 微囊藻毒素．LR阻抗型免疫电化学检测方法的研究 学科、专业：营养与食品卫生学 入学时间：2007—09 硕士研究生姓名： 石慧 答辩时间：2009一07 指导教师：王洪新教授、孙秀兰副教授 授予学位时间： 微囊藻毒素．LR(MC．LR)是淡水水体中最普遍且毒性最强的一类蓝藻毒素。目前， 藻毒素检测方法多需昂贵仪器且操作繁杂，无法满足快速检测的要求。因此，研究和建 立一种快速，灵敏，简便的检测方法具有重要意义。本文以合成MC．LR完全抗原，制 备特异性多克隆抗体为基础，并结合免疫传感技术和纳米材料自组装法等，构建电化学 阻抗型免疫传感检测方法，主要研究内容如下： 采用“活泼酯法”和“碳二亚胺法”合成MC．LR免疫抗原及检测抗原。免疫新西兰大白 竞争标准曲线，线性范围为0．25---4 的交叉反应率约为21．9％外，与MC．LW，MC．LF的交叉反应率均小于1．O％。 记型免疫传感检测方法。对MC．LR的阻抗响应线性范围为0．05-300ng／mL,最低检出 mira对饮用水源水平均加标回收率在 限为1．82x10五ng／mL(S／N=3)；检测时间仅为15 96．8％～112．5％之间：对修饰电极循环扫描42圈后，峰电流无显著变化，变异系数为 3．58％；4。C下保存30天稳定性良好。 基于1，6．己二硫醇(HDT)自组装技术和纳米金吸附作用相结合的方法固定微囊 藻毒素抗体构建免疫传感器。结果表明，阻抗响应线性范围为0．2595 ng／mL，检出限 对标准偏差为7．84％14。C下储存30天后阻抗响应信号无明显变化；应用于饮用水，样品 的平均加标回收率为92．6％～118．3％；检测时间为15min。 了MC．LR免疫传感检测方法。本法具更高的灵敏度，最低检出限为1．7×10。3ng／mL (S／N=3)，在5x10弓---lxl02 ng／mL范围内成良好的线性相关；对饮用水平均加标回收 率为80．95％．127．23％；水中常见的离子对于MC．LR的测定均无明显干扰。 首次提出电极保护液的设计构想。基于室温离子液体的优良特性，在4。C下，对修 饰电极的稳定性进行了长达60天的考察，筛选出了具有有利于抗体蛋白维持其稳定性的 离子液体及其最佳浓度。利用圆二色谱法初步探究了RTILs维持抗体蛋白的稳定性的机 理，揭示了抗体蛋白在RTILs中的构象变化。 本研究所建立的检测饮用水中MC．LR的阻抗型电化学免疫传感检测方法，灵敏、快 速、方便，具有良好的发展前景，为实现直接、实时、原位、在线的MC．LR日常监测工 作提供了重要的实验依据。 关键词：微囊藻毒素．LR；多克隆抗体；免疫传感器；交流阻抗谱；室温离子液体 Abstract Abstract theoccurrenceof Recently，with widespreadheavycyanobacterial seriouswater is attention． andfood safety involvingmicrocystinsattractingglobal episodes themostcommonandtoxicinall Microcystin—LR(MC·LR)js cyanophyceantoxin．Existing methodsforMC-LRhave