植物组织培养试验指导植物组织培养试验指导植物组织培养试验指导.PDF

《植物组织培养实验指导《植物组织培养实验指导》》 《《植物组织培养实验指导植物组织培养实验指导》》 遗传育种教研室遗传育种教研室 遗传育种教研室遗传育种教研室 于翠梅于翠梅、李兴涛、李兴涛、曹萍、曹萍 于翠梅于翠梅、、李兴涛李兴涛、、曹萍曹萍 1 实验一实验一：实验室基本结构与设备的识别：实验室基本结构与设备的识别 实验一实验一：：实验室基本结构与设备的识别实验室基本结构与设备的识别 一、一、 目的目的 一一、、 目的目的 认识植物组织培养实验室的基本结构，必须的基本设备及其用途与作用方法。 二、二、 实验内容实验内容 二二、、 实验内容实验内容 1.1. 实验室的基本结构实验室的基本结构 1.1. 实验室的基本结构实验室的基本结构 细胞与组织培养实验室必须满足三个基本的需要，即：实验准备，包括培养基 配制，洗涤与灭菌等；无菌操作；控制培养。因此基本实验室组成应包括准备室、 接种室和培养室。 准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。要求宽敞明亮，通风条件 好。接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无 菌。房间一般不宜过大，其规模根据实验需要而定。接种室除了出入口和通气口外， 应行密闭。培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要要求是要能控制光照 和温度，其次为防止微生物感染，培养室应保持干燥和清洁。 同时要求对培养物进行细胞学及分子生物学研究时应建立相应的辅助实验室。 2.2. 常用设备配置常用设备配置 2.2. 常用设备配置常用设备配置 (1) 基本设备：冰箱、天平、酸度计、微波炉、、搅拌器。 (2) 灭菌设备：蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫 外灯。 (3) 无菌操作设备：净化工作台。 (4) 光温控制设备：时间程序控制器、空调。 (5) 细胞培养设备：培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、摇床等。 (6) 细胞学鉴定设备：光学研究显微镜、倒置显微镜。 (7) 分子生物学研究设备：常温离心机、超低温高速离心机、PCR仪、电泳仪、 凝胶成像分析系统等。 (8) 除上述基本设备外，如果有条件和需要还可配制摄影设备、生化分析设备等。 3.3. 培养器皿及实验用具培养器皿及实验用具 3.3. 培养器皿及实验用具培养器皿及实验用具 (1) 玻璃器皿：试管、三角烧瓶 （锥形瓶）、培养皿、试剂瓶、烧杯、量筒、容 量瓶、吸管、滴瓶、称量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。 (2) 金属材质用具：镊子类 （包括接种或转移愈伤组织用的20－25cm长型镊子及 镊取较小的植物组织的尖端弯曲 “枪型”镊子）、解剖刀及各种剪刀类等。 三、三、 作业作业 三三、、 作业作业 2 1、写出实验室的布局 2、写出实验设备的名称及用途 3、收获与体会 实验二：洗涤与灭菌 一、一、 实验目的实验目的： ： 一一、、 实验目的实验目的：： 学习各种培养器皿及实验用具的洗涤和灭菌方法以及 与组织培养有关的器皿，用具、培养基、接种室、培养室等灭菌方法。 二、二、实验原理实验原理： ： 二二、、实验原理实验原理：： 1.1. 洗涤洗涤 1.1. 洗涤洗涤 (1)玻璃器皿的洗涤 ① 新购置的玻璃器皿的洗涤：因有游离碱性物质，使用前先用 1%稀盐酸浸泡 一夜，然后用肥皂水洗净，清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗一次，干后备用。 ② 已用过玻璃器皿：先将残渣除去；用清水洗净，再用热肥皂水或洗衣粉洗 净，清水冲洗干净，最后用蒸馏水漂洗一次，干后备用。 ③ 对一些不宜刷洗的玻璃器皿如：吸管，滴管及较脏的器皿等先用去污粉和 去油剂刷洗，自来水冲干净后，